木蝴蝶探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒采用实时荧光定量PCR（探针法）技术，专用于木蝴蝶（Semen oroxyli）的快速、高特异性核酸鉴定。通过靶向木蝴蝶高度保守基因区域设计的引物与探针，结合Taq酶的5'核酸外切酶活性，实现扩增过程的实时荧光信号检测，适用于科研场景下的物种鉴定及RNA定量分析。

产品特点

高灵敏度与特异性：优化引物及探针仅靶向木蝴蝶基因，避免与其他物种交叉反应。

即开即用：预混缓冲液与酶体系，用户仅需提供RNA模板。

内置对照：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），便于区分假阴性结果。

兼容性：适配多数病毒RNA提取试剂盒，支持20μL或40μL反应体系（视规格而定）。

适用范围：仅供科研使用，不可用于临床诊断。

规格与成分

| 成分 | 规格/含量 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 木蝴蝶引物混合液 | 100 μL |

| 木蝴蝶探针 | 50 μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL |

| 使用说明书 | 1份 |

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月，避免反复冻融。

实验流程

标准曲线制备（以10²-10⁷拷贝/μL梯度为例）

标记6管稀释液，依次加入阳性对照进行10倍梯度稀释（需独立操作区）。

冰上暂存稀释后标准品。

RNA提取

建议设置阴性/阳性提取对照（水或阳性对照稀释液）。

自备RNA提取试剂，或兼容柱式提取法。

qRT-PCR反应（20μL体系示例）

| 组分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 探针 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| RNA模板/标准品/水 | 5 μL | 5 μL水 | 5 μL标准品 |

反应程序：

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）

数据分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性判定：

阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线典型；

阴性：Ct ≥ 40；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

操作需分区（试剂准备、样本处理、扩增区），避免污染。

阳性对照需最后加入，防止气溶胶污染。

实验废弃物需按生物危害品处理。

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