牛附红细胞体（牛嗜血支原体）探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 牛附红细胞体（牛嗜血支原体）探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Eperythrozoon bovis Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5253 |
实验原理
基于探针法荧光定量PCR技术，通过特异性引物和探针靶向牛附红细胞体（Eperythrozoon wenyoni）保守序列，实现高灵敏度（可达几百拷贝/反应）和特异性检测，避免交叉污染。
试剂盒组成
反应液A-TSV-I：含PCR缓冲液、dNTPs、Mg²⁺等。
酶混合液（B-I+R-I）：含热启动DNA聚合酶、逆转录酶（若需）。
阳性对照：1×10⁸拷贝/μL牛嗜血支原体DNA。
阴性对照：无核酸酶水。
操作步骤
1. 样本制备
使用配套DNA提取试剂盒或自选方法提取样本DNA，建议设置N+2个样本（含阴性/阳性对照）。
阳性对照（PC）：取10μL 1×10⁵拷贝/μL稀释液；阴性对照（NC）：使用无核酸酶水。
2. 标准曲线制备（定量检测需选）
将阳性对照梯度稀释（10⁷至10²拷贝/μL），每个浓度分装后冰上保存。
3. PCR反应体系配制（20μL/管）
| 成分 | 体积（μL） |
| 反应液A-TSV-I | 17.0 |
| 酶混合液（B-I+R-I） | 1.0 |
| 模板DNA | 2.0 |
4. 扩增程序
恒温荧光仪：63℃反应60分钟。
荧光定量PCR仪：
预变性：95℃ 3分钟；
循环：95℃ 15秒 → 63℃ 45秒（收集FAM荧光），共60循环。
结果判读
定量分析：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct值≤36，典型S型扩增曲线；
阴性：Ct值≥40或无扩增；
可疑（36<Ct<40）：需复测。
注意事项
分区操作：样本制备、试剂配制、扩增需在不同区域进行。
避免污染：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%酒精清洁台面。
质量控制：阴性对照Ct值应≥40，阳性对照Ct值≤36。
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