猫衣原体探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 猫衣原体探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Chlamydia felis Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5263 |
产品概述
本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，特异性检测猫衣原体（Chlamydia felis，Cf或CP）的核酸。适用于眼睑分泌物、结膜分泌物、鼻腔分泌物等临床样本的病原学诊断，具有高灵敏度、高特异性及全流程质控特点。
检测原理
探针法设计：针对猫衣原体保守基因设计引物及探针，探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现定量分析。
内参基因：部分试剂盒以猫RPS7基因作为内标，避免假阴性。
产品特点
高灵敏度：最低检出限达1拷贝/Test，扩增效率≥96%（R²≥0.999）。
高特异性：与巴尔通体、弓形虫、猫疱疹病毒等常见病原体无交叉反应。
质控保障：含阳性对照（无传染性DNA片段）和阴性质控，支持室内质控。
便捷性：预分装冻干微球或即用型液体组分，常温运输（部分需-20℃保存）。
试剂盒组成
| 组分 | 规格（50T） | 功能 |
| qPCR缓冲液 | 500μL×1 | 提供反应体系 |
| 酶混合液 | 50-100μL | 含逆转录酶、Taq酶 |
| 引物探针混合液 | 100μL | 特异性扩增靶序列 |
| 阳性对照 | 50μL（1×10⁸拷贝/μL） | 标准曲线制备 |
| 模板稀释液 | 1mL | 样本稀释 |
操作步骤
1. 样本处理
核酸提取：推荐磁珠法或离心柱法提取RNA/DNA。
标准曲线制备：梯度稀释阳性对照（10²~10⁷拷贝/μL）。
2. PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积 |
| 缓冲液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 引物探针混合液 | 2μL |
| 模板RNA/DNA | 5μL |
3. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 1 |
| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |
| 扩增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） | 40 |
结果判读
阳性：Ct值≤40，扩增曲线呈指数增长。
阴性：无Ct值或Ct值＞45。
可疑：40<Ct≤45，需复测确认。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行。
防污染：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸清洁台面。
储存：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤5次）。
局限性
基因突变可能导致假阴性；交叉污染可能导致假阳性。
仅限科研使用（部分注明不可用于临床诊断）。
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