产品概述
本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专用于**冬瓜皮（Exocarpium benincasae）**的特异性鉴定。通过保守区设计的引物与探针，可实现高灵敏度、高特异性的DNA检测，适用于科研实验。
产品名称 | 冬瓜皮探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Exocarpium Benincasae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5136 |
试剂盒组成
PCR预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液（2×浓度）。
引物与探针：针对冬瓜皮保守序列设计的特异性引物及荧光标记探针。
阳性对照：86 bp DNA片段（1×10^8 拷贝/μL），不含活体病原。
阴性对照：无模板对照（NTC）。
核酸释放剂（部分品牌提供）：用于DNA提取的试用装。
实验步骤
1. 样品DNA制备
使用兼容的DNA提取试剂盒纯化样本DNA，或采用试剂盒附赠的裂解液（如适用）。
2. 阳性对照稀释（6个梯度，10^2~10^7 拷贝/μL）
按1:10比例逐级稀释阳性对照，独立操作以避免污染。
3. qPCR反应体系（20 μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| 2× PCR预混液 | 10 |
| 引物探针混合液 | 2 |
| DNA模板 | 5 |
| 超纯水 | 补至20 |
4. PCR扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 1 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 15 sec | 30 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 15 sec | |
5. 数据分析
以阳性对照Ct值绘制标准曲线，计算待测样本浓度。
结果判读：
阳性：Ct值＜38，有明显指数扩增。
可疑：38≤Ct＜40，需复测确认。
阴性：Ct≥40或无扩增。
注意事项
操作需在独立洁净区域进行，避免交叉污染。
仅限科研使用，不适用于临床诊断。
不同仪器（如ABI 7500、LightCycler480）需调整ROX参比染料使用（详见说明书）。
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