肉毒梭状芽孢杆菌G型外毒素基因探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 肉毒梭状芽孢杆菌G型外毒素基因探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Clostridium botulinum Type G Neurotoxin Gene Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5266 |
产品概述
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用TaqMan探针法，特异性检测肉毒梭状芽孢杆菌G型外毒素基因。适用于科研领域对食品、环境样本及临床标本中肉毒梭菌的定性和定量分析，不可用于临床诊断。
核心原理
探针设计：探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，特异性结合目标序列。
信号释放：PCR扩增时，Taq酶切割探针，释放荧光信号，实时监测扩增进程。
定量分析：通过标准曲线计算样本中病原体的拷贝数，线性范围达5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。
产品组成
| 成分 | 规格 | 功能说明 |
| qPCR缓冲液 | 500μL | 含dNTPs、Mg²⁺等反应组分 |
| qPCR酶混合液 | 50–100μL | 含热启动Taq酶及逆转录酶 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 用于标准品稀释 |
| 引物-探针干粉/混合液 | 50T/100μL | 特异性引物及探针 |
| 阳性对照（无传染性DNA） | 50μL（10^7–10^8拷贝/μL） | 标准曲线构建及质控 |
操作流程
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），独立操作避免污染。
标记离心管（6–1号），依次加入稀释液和模板，涡旋混匀后冰上保存。
2. 样本DNA提取
建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC），使用兼容的DNA提取试剂盒。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管/标准管 | 阴性对照管 |
| qPCR缓冲液 | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL |
| 引物-探针混合液 | 2μL | 2μL |
| 模板DNA/标准品 | 5μL | — |
| 超纯水 | — | 5μL |
4. 扩增程序
逆转录：50℃ 30 min（若含RNA步骤）。
预变性：94℃ 10 min。
40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）。
结果判读
定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，推算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct≤39，扩增曲线呈S型。
阴性：Ct≥40或无扩增。
灰区（39<Ct<40）：需复测。
注意事项
防污染：分区分操作，使用带滤芯枪头，实验后消毒台面。
储存：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤10次），有效期12个月。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；交叉污染可能导致假阳性。
提取效率差异可能影响定量准确性。
技术参数
灵敏度：100–500拷贝/反应。
特异性：经生物信息学验证，无交叉反应。
重复性：CV≤5%。
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