致泻性大肠杆菌（致泻性大肠埃希氏菌）通用探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 致泻性大肠杆菌（致泻性大肠埃希氏菌）通用探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Diarrheagenic Escherichia coli Universal Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5283 |
产品概述
本试剂盒采用TaqMan探针法荧光定量PCR技术，专为快速、灵敏检测致泻性大肠杆菌（致泻性大肠埃希氏菌）而设计。该产品通过特异性引物和探针组合，可准确识别目标病原体，适用于多种样本类型的检测。
产品特点
高灵敏度：优化的引物和探针设计，检测限可达10²-10⁷拷贝/μL
操作简便：即开即用型试剂，用户只需提供样品模板
特异性强：针对高度保守区设计，避免与其他微生物发生交叉反应
质量控制：提供阳性对照，便于区分假阴性结果
闭管检测：减少污染风险，提高实验安全性
高通量：50次20μL体系反应，满足批量检测需求
技术参数
规格：50T/盒
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月
运输条件：低温运输
适用仪器：兼容主流荧光定量PCR仪
检测原理
基于TaqMan探针技术，在PCR扩增过程中，探针与目标序列特异性结合后被Taq酶切割，释放荧光信号。通过实时监测荧光强度变化，实现对目标DNA的定量检测。
适用范围
食品安全检测（肉制品、生鲜蔬菜、乳制品等）
临床腹泻病原体筛查
水质卫生监测
食源性疾病爆发调查
进出口食品检验检疫
样本处理
样本类型
食品样品：按《食品卫生微生物学检验》要求采集与预培养
血液样品：无菌采集静脉血2mL，EDTA抗凝
粪便样品：取新鲜样本置于灭菌收集管
病灶样本：采集新鲜渗出物或粘液脓血
核酸提取
建议使用专业核酸提取试剂盒，提取后应尽快检测或-80℃保存
实验操作
试剂准备
将所有组分解冻后充分混匀，短暂离心
按反应数配制预混液（避免反复冻融）
阳性对照稀释
准备6个稀释管，分别标记7-2号
每管加入45μL专用稀释液
梯度稀释阳性对照（10E2-10E7拷贝/μL）：
7号管：5μL原液→10E7拷贝/μL
依次稀释至2号管（10E2拷贝/μL）
PCR反应体系
推荐反应体积：20μL
反应程序：
预变性：95℃ 3分钟
扩增循环：95℃ 15秒，60℃ 1分钟（45个循环）
结果分析
设置阈值线在指数扩增期
标准曲线法定量：以Ct值与log拷贝数绘制标准曲线
结果判读：
阳性：Ct值≤35且有典型扩增曲线
可疑：35<Ct值<40，建议重复检测
阴性：无扩增信号或Ct值≥40
注意事项
实验分区操作：试剂准备区、样本处理区、扩增区严格分离
使用带滤芯枪头，避免交叉污染
阳性对照稀释需在独立区域进行
本产品仅限科研用途
避免反复冻融试剂，影响检测性能
质量控制
每批实验应包含：
阴性对照（无模板对照）
阳性对照（各梯度稀释）
内参对照（如适用）
标准曲线相关系数R²应≥0.98
扩增效率应在90-110%之间
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