猫杯状病毒前病毒探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 猫杯状病毒前病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Feline Calicivirus Provirus Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5311 |
预期用途
本试剂盒用于检测猫杯状病毒前病毒（FCV）核酸，适用于科研领域对FCV感染的辅助诊断。检测结果仅供研究参考，不可用于临床诊断或治疗。
检验原理
采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，针对FCV基因保守区域设计特异性引物及探针。在反应体系中，若存在FCV核酸模板，PCR扩增释放荧光信号，通过仪器实时监测荧光强度，实现定性和定量分析。
试剂组成
| 成分 | 规格 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |
| FCV探针法qRT-PCR引物混合液 | 100 μL |
| FCV qRT-PCR探针 | 50 μL |
| FCV阳性对照（1×10<sup>8</sup>拷贝/μL） | 50 μL |
| 说明书 | 1份 |
储存条件及有效期
运输条件：低温运输（-20℃）。
保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次）。
有效期：12个月。
适用仪器
兼容ABI系列、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等荧光定量PCR仪。
自备试剂与耗材
无RNA酶的1.5 mL离心管、0.2 mL PCR反应管、滤芯吸头（10/200/1000 μL）。
离心机、振荡混合器、移液器。
病毒RNA提取试剂盒（推荐柱式提取法）。
样品要求
样本类型：全血、血清、粪便、呼吸道分泌物、拭子等。
保存与运输：
短期保存：-20℃；长期保存：-70℃（≤6个月）。
运输需使用2~8℃冰袋，避免反复冻融。
使用方法
1. 标准曲线制备（10<sup>2</sup>–10<sup>7</sup>拷贝/μL梯度稀释）
标记6管，依次稀释阳性对照至6个浓度梯度，冰上保存备用。
2. RNA提取
使用商品化RNA提取试剂盒，设置阴性/阳性对照（N+2样本数）。
3. qRT-PCR反应（20 μL体系）
| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |
| PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探针 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| RNA模板 | 5 | - | - |
| 标准品 | - | - | 5 |
| 超纯水 | - | 5 | - |
4. 反应程序
逆转录：50℃ 30 min
预变性：94℃ 10 min
PCR循环（40次）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）
数据分析
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性分析：阴性对照Ct值≥40，阳性对照Ct值≤35。
注意事项
操作需分区（样本制备区、试剂配制区、扩增区），避免交叉污染。
阳性对照为人工合成DNA片段，无传染性。
不同批号试剂不可混用。
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