检测原理
基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法（TaqMan原理）：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
定量分析：通过监测荧光信号增长（Ct值）实现靶序列的定性与定量检测。
产品名称 | 白扁豆探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Semen Lablab Album Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5209 |
产品特点
高灵敏度与特异性：引物及探针针对白扁豆高度保守序列设计，避免交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供样品RNA/DNA模板。
双功能检测：支持定性与定量分析，定量线性范围达5个数量级（10^2~10^7拷贝/μL）。
内置对照：含阳性对照（无传染性DNA片段）及阴性对照，确保结果可靠性。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 功能 |
| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| qPCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶（RT）及Taq DNA聚合酶 |
| 荧光模板稀释液 | 1 mL | 标准品梯度稀释 |
| 引物混合液 | 100μL | 特异性扩增白扁豆靶序列 |
| qPCR探针 | 50μL | 靶标检测荧光信号生成 |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备 |
| 说明书 | 1份 | 操作指南 |
操作步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^7~10^2拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. 样品制备
提取样品RNA/DNA（推荐柱式提取法），设置阴性（NC）及阳性对照（PC）。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板（样品/标准品/对照） | 5 |
4. 反应程序
逆转录：50℃ 30 min（若需RT步骤）。
预变性：94℃ 10 min。
扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光信号）。
数据分析
定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样本浓度。
定性判定：
阳性：Ct ≤ 35（或36），扩增曲线呈S型。
阴性：Ct ≥ 40或无信号。
可疑：35<Ct<40需复测，复测Ct<40判为阳性。
注意事项
分区操作：样品制备、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。
质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。
用途限制：仅限科研使用，不可用于临床诊断。
重复建议：定量分析建议至少2次重复。
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