产品用途
科研用途，适用于人Y染色体SRY基因的定性与定量检测，不可用于临床诊断。
产品名称 | 人Y染色体性别决定区（SRY）探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Human Y-chromosome Sex-determining Region (SRY) Probe-based Real-time PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5235 |
检测原理
SRY基因位于Y染色体短臂（Yp11.3），是雄性性别决定的关键基因。本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，通过特异性引物和FAM标记探针（淬灭基团为BHQ）靶向扩增SRY基因保守区域，结合标准曲线实现高灵敏度检测（最低检测限达100拷贝/反应）。
产品组分
| 组分名称 | 规格 |
| 2×Probe qPCR MasterMix | 500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 超纯水 | 1mL |
| SRY qPCR引物-探针干粉 | 50T |
| SRY qPCR阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50μL |
操作步骤
1. 阳性对照稀释（标准曲线制备）
稀释梯度：10^1~10^6拷贝/μL（6个10倍梯度）。
操作要点：
使用带滤芯枪头，在独立区域操作以避免污染。
取阳性对照（10^7拷贝/μL）按梯度稀释，每步震荡混匀1分钟，冰上暂存。
2. 样品DNA制备
样本类型：血液、组织、细胞等（需用户自备DNA提取试剂）。
质控要求：设置制备阳性对照（PC）和阴性对照（NC），推荐提取N+2个样本（含质控）。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |
| 2×Probe qPCR MasterMix | 10 | 10 | 10 |
| SRY引物-探针混合液 | 3 | 3 | 3 |
| 待测DNA模板 | 7 | — | — |
| 超纯水 | — | 7 | — |
| 标准曲线稀释液 | — | — | 7 |
4. PCR扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 荧光采集（FAM通道） |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | 否 |
| 40个循环 | 95℃ | 15 sec | 否 |
| | 60℃ | 1 min | 是 |
数据分析
有效性判定：
阳性对照Ct值≤35且阴性对照无扩增，实验有效。
若阳性对照无信号或阴性对照出现扩增，需排查污染或重复实验。
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴计算样本拷贝数。
注意事项
防污染措施：操作分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用滤芯枪头。
引物-探针干粉：使用前离心，加入162μL超纯水复溶，未用完部分-20℃保存。
适用范围：仅限科研，不可用于临床诊断或司法鉴定。
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