HEK-293（293）人胚肾细胞

商品属性

英文名称：HEK-293（Human Embryonic Kidney 293）

细胞来源：源自人胚胎肾组织，经腺病毒5（Ad5）E1区基因转染永生化。

细胞形态：上皮样，贴壁生长，直径约11–15 µm，可呈扁平（贴壁）或圆形（悬浮）。

基因组特征：亚三倍体，64条染色体为主，含3条X染色体拷贝；腺病毒5的4 kb片段整合于19号染色体（19q13.2）。

生物安全等级：2级（需在BSL-2实验室操作）。

培养条件

培养基：MEM-EBSS（含Earle’s盐）或DMEM，补充10%胎牛血清（FBS）、2 mM L-谷氨酰胺。

CO₂环境：5%–10% CO₂（与NaHCO₃浓度匹配，如2.0 g/L对应5% CO₂）。

pH缓冲：可添加10–25 mM HEPES增强缓冲能力（尤其无CO₂环境）。

生长特性：

贴壁培养：单层生长，汇合度达80%–90%时需传代。

悬浮培养：可形成球体，需优化搅拌速度及接种密度。

倍增时间：24–45小时（平均30小时）。

传代与冻存

传代方法：

使用Accutase或胰酶消化。

接种密度：1–4×10⁴ cells/cm²，4天可达汇合。

冻存液：含90% FBS + 10% DMSO，液氮长期保存。

常见问题与解决方案

pH波动：

检查CO₂张力与NaHCO₃匹配性，或改用不依赖CO₂的培养基。

避免培养瓶盖过紧（建议松开1/4圈）。

污染控制：严格无菌操作，定期检测支原体。

应用领域

蛋白表达：广泛用于重组蛋白、病毒载体（如腺病毒、AAV）生产。

基因编辑：CRISPR/Cas9、siRNA转染的常用宿主。

药物筛选：受体-配体相互作用研究及毒性测试。

注意事项

HEK-293T衍生细胞含SV40 T抗原，可增强质粒复制效率，但需区分用途。

避免频繁传代（建议≤50代），以防遗传漂变。

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