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人神经母细胞瘤细胞培养基

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K3101

存储条件：-20℃，1 年 避光保存

产品活性：MCE 人神经母细胞瘤细胞培养基是一种专门为促进人源神经母细胞瘤原代细胞在体外生长而设计的培养基。

描述及优势：MCE 人神经母细胞瘤细胞培养基是一种专门为促进人源神经母细胞瘤原代细胞在体外生长而设计的培养基。 本产品基于碳酸氢盐的缓冲系统，包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机与无机化合物、激素、生长因子及微量元素等，同时添加了胎牛血清和原代细胞培养专用抗生素，能够为人源神经母细胞瘤原代细胞提供理想的体外生长环境，提高肿瘤组织原代细胞培养的成功率。

操作流程：实验前准备 1. 提前一晚将培养基置于 4℃ 冰箱解冻，提前 30 min 将培养基取出恢复至室温 2. 经 γ 射线照射处理的 NIH-3T3 细胞（40 GY 辐照） 注：NIH-3T3 细胞为支持人神经母细胞瘤原代细胞的饲养细胞 (Feeder cells)。 人神经母细胞瘤原代细胞培养 1. 细胞接种：根据培养皿类型，参考下表接种人源神经母瘤原代细胞，并添加经 γ 射线照射处理的 NIH-3T3 细胞。置于 5% CO2, 37°C 培养箱培养。 2. 换液：原代细胞初次接种后 2 - 3 天尽量避免移动以免细胞贴壁效果差，培养过程中如观察到培养基颜色变黄但细胞并未长满可采取半换液法进行换液。 注：原代细胞初次接种可能会贴壁较慢或贴壁不牢，应尽量减少取出观察的次数，建议 2 - 3 天一次。 3. 镜检：如培养过程中用显微镜观察到细胞未长满但饲养细胞不足时，可适当补充经 γ 射线照射处理的 NIH-3T3 细胞。 注：饲养细胞添加量一般为初始添加量的一半。 人神经母细胞瘤原代细胞传代 1. 镜检：用显微镜观察细胞形成克隆或神经元样细胞增殖情况，当细胞汇合度达 85% - 95% 即可进行传代。 2. 细胞消化：从培养箱中取出细胞，吸弃原有培养基，添加适量 0.05% 胰酶消化液洗涤 5 s，吸弃胰酶。重新添加适量 0.05% 胰酶消化液，37℃ 孵育 2 - 5 min。 注：消化时间不可过长，过度消化会损伤突触类细胞，影响细胞状态。建议控制在 3 min 内。 3. 镜检：消化后取出培养皿并轻拍侧面，显微镜下观察细胞消化状态。 4. 终止消化：镜检观察到细胞变圆并开始脱落时即可添加适量培养基终止消化。将细胞悬液转移至离心管中，1,500 rpm 离心 3 min，弃上清，保留细胞沉淀。 5. 细胞计数：用 1 - 5 mL 培养基重悬细胞沉淀，进行活细胞计数。 6. 细胞接种：将细胞悬液按合适的必读接种于培养皿中，并添加经 γ 射线照射处理的 NIH-3T3 细胞（接种比例见上表）。补加培养基至所需体积，十字交叉法混匀。 7. 培养：将培养皿置于 5% CO2, 37°C 培养箱培养。 8. 换液、镜检及补加饲养细胞等操作同上。

详情参考：www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/human-neuroblastoma-cell-culture-medium.html