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人 CD8+ T 细胞阴性分选试剂盒

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K0351

存储条件：4℃，2 年 磁珠禁止冻结

产品活性：MCE 人 CD8+ T 细胞阴性分选试剂盒可从人外周血单个核细胞 (PBMC) 中分离出 CD8>+ T 细胞。

描述及优势：MCE 人 CD8+ 细胞阴性分选试剂盒可从人外周血单个核细胞 (PBMC) 中分离出 CD8+ T 细胞。原理为生物素 (Biotin) 标记的单克隆抗体对非目标细胞（非 CD8+ T 细胞）进行标记，再通过链霉亲和素 (Streptavidin) 标记的磁珠对非目标细胞进行去除，从而达到人 CD8+ T 细胞分选的目的。 本试剂盒操作简单，各成分对细胞均无毒性，且可实现高纯度细胞分离的目的，适用于从新鲜分离或冻存的人外周血单个核细胞 (PBMC) 中分选出 CD8+ T 细胞。分离的细胞可用于下游应用，如流式细胞术、细胞培养、Western blot 分析、免疫沉淀、报告基因检测或 DNA/RNA 提取等。 MCE 人 CD8+ T 细胞阴性分选试剂盒具有如下优点 1. 简单快速：30 min 即可分选得到目的细胞； 2. 无需分离柱：使用磁性分离器即可实现目的细胞的快速分离； 3. 高纯度：分选细胞纯度可达 90%； 4. 高活性：分选后细胞无抗体和磁珠标记，活性高且功能良好可用于下游实验。

操作流程：1. 磁珠准备：充分重悬链霉亲和素磁珠，取 20 μL 至 1.5 mL EP 管中，加入 1 mL 分选缓冲液，10,000 × g 离心 1 min，弃上清。重复洗涤磁珠 1 - 2 次，加 20 μL 分选缓冲液重悬磁珠。 注：最后磁珠重悬分选缓冲液的用量与初始吸取磁珠体积需一致。 2. 制备人外周血单核细胞 (PBMC) 悬液：通过 Ficoll 密度梯度离心法从人外周血中分离并收集 PBMC，PBS 洗涤细胞并离心。将 PBMC 重悬于分选缓冲液中，调整细胞密度为 1×108 cells/mL。 3. 抗体标记：取 100 μL 细胞悬液（1 × 107 个细胞）加入无菌流式管底部，再加入 2 μL 生物素化抗体预混液，混匀后 4°C 孵育 15 min。 注：a. 细胞悬液直接加入流式管底部，避免沿管壁加入。 b. 如果分选更多细胞，可按比例增加生物素化抗体预混液的用量。 4. 细胞洗涤：细胞-抗体孵育完成后，用 10 倍体积分选缓冲液洗涤细胞 1 次，500 g 离心 5 min，弃上清。 5. 磁珠标记：离心完成后用 100 μL 分选缓冲液重悬细胞，加入 20 μL 清洗过的磁珠，混匀后 4°C 孵育 10 min。 注：如果分选更多细胞，则按比例增加磁珠用量。例如分选 5 × 107 个细胞，在 500 μL 细胞悬液中加入 10 μL 抗体预混液和 100 μL 磁珠。如果分选少于 1 × 107 个细胞，则将细胞悬液体积补至 100 μL，加入 2 μL 抗体预混液和 20 μL 磁珠。 6. 洗涤：孵育完成后，在流式管中加入 2.5 mL 分选缓冲液，用移液器轻柔吹吸混匀（避免剧烈振荡或者上下颠倒混匀）。 7. 分选：将含有细胞的分选流式管置于磁性分离器上，磁性分离 5 min。 8. 收集细胞：将细胞悬液轻柔倒入一个无菌离心管中（倾倒过程中流式管不可脱离磁性分离器），此细胞悬液中即包含纯化的小鼠中性粒细胞，500 × g 离心 5 min。离心后弃上清，收集细胞。 9. 根据实验需要洗涤细胞，将细胞重悬于所需缓冲液或培养基中，即可用于后续分子生物学或细胞生物学实验。 注：如需进一步提高细胞的纯度，可将细胞悬液 500 g 离心 5 min，弃上清并用 100 μL 分选缓冲液重悬细胞，参考如上步骤进行二次纯化，二次纯化细胞纯度可提高 2% - 4%。

详情参考：www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/human-cd8-t-cells-negative-selection-kit.html