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Anti-V5 Magnetic Beads Anti-V5 磁珠

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K0249

产品活性：MCE Anti-V5 磁珠可用于检测和纯化 V5 融合表达蛋白，也可用于免疫沉淀 (IP)、免疫共沉淀 (Co-IP) 等实验。

描述及优势：V5 标签是由 14 个氨基酸组成的多肽片段 GKPIPNPLLGLDST。 MCE Anti-V5 磁珠由高品质的鼠源抗 V5 单克隆抗体与磁珠共价偶联制成，具有高载量、高特异性和性质稳定等特点。 本品可用于检测和纯化 V5 融合表达蛋白，也可用于免疫沉淀 (IP)、免疫共沉淀 (Co-IP) 等实验。

操作流程：样品制备 血清：若目标蛋白丰度较高，建议稀释血清样品至目标蛋白终浓度为 50-150 μg/mL，置于冰上备用（或置于 -20°C 长期保存）。 悬浮细胞：1. 离心收集细胞 (4°C, 500 g, 10 min)，弃上清后称重，PBS (1×) 洗涤 2 次；2. 按照 5-10 μL/mg 细胞的比例加入裂解缓冲液，同时加入适量蛋白酶抑制剂，混匀后置于冰上处理 10 min 充分裂解；3. 离心 (4°C, 14000 g, 10 min) 收集上清液，置于冰上备用或 -20°C 长期保存。 贴壁细胞：1. 移去培养基，PBS (1×) 洗涤 2 次；2. 用细胞刮棒刮脱细胞，收集至 1.5 mL EP 管内，按照 20-30 μL/1 × 105 个细胞的比例加入裂解缓冲液，同时加入适量蛋白酶抑制剂，混匀后置于冰上处理 10 min 充分裂解；3. 离心 (4°C, 14000 g, 10 min) 收集上清液，置于冰上备用或 -20°C 长期保存。 注：建议根据样本类型选择合适的裂解液，优先推荐 IP 裂解液 (MCE Cat. No. HY-K1000)。 磁珠预处理 磁珠充分混悬，取适量磁珠置于 1.5 mL EP 管中，加入 500 μL 洗涤缓冲液，充分混悬，置于磁力架，磁性分离，弃上清；重复以上洗涤步骤 2 次。 注：a. 为保证磁珠均匀分布，建议通过反复颠倒、轻微涡旋或用混匀仪彻底混匀磁珠。 b. 每 500 μL 细胞裂解液建议使用 20 μL 磁珠。 免疫沉淀 1. 结合：将含有目标蛋白的样品加入到磁珠复合物中，置于混匀仪上 4°C 孵育 2-4 h 或室温孵育 1-2 h （具体孵育时间可根据结合效果调整）。 2. 洗涤：孵育完成后，磁性分离，取出上清（上清可保留，用于电泳鉴定）。使用 1 mL 洗涤缓冲液清洗，磁性分离，弃上清，重复 2-3 次。得到目标蛋白-磁珠复合物。 洗脱 提供两种洗脱方案，可根据需要选择不同的洗脱方案。 1. 酸性洗脱：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。 在离心管中加入 100 μL 洗脱缓冲液，充分混匀后室温孵育 5-10 min，磁性分离，收集上清并立即用中和液缓冲液中和 pH （总洗脱液体积的 1/10），样品可用于后期功能分析。 注：洗脱后蛋白短期可 4°C 存放，若要长期存放建议置于 -20°C 中。 2. 变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。 在离心管中加入 100 μL 蛋白上样缓冲液 (1×)，充分混匀后 95°C 加热 10 min。磁性分离，取上清进行电泳检测。

详情参考：www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/anti-v5-magnetic-beads.html