检测目标
靶基因：
HEF基因（血凝素-酯酶融合蛋白，型特异性标志）
NP基因（核蛋白，辅助分型）
覆盖亚型：C/Yamagata和C/Victoria谱系（基于HEF氨基酸变异位点）。
技术原理
双重荧光RT-PCR：
FAM标记HEF基因（病毒分型） + HEX标记NP基因（载量定量），内标（Cy5）监控全程。
灵敏度达5拷贝/μL，较传统MDCK细胞培养法（7天）提速至2小时。
适用样本
临床：鼻咽拭子（病毒载量最高）、支气管肺泡灌洗液（重症肺炎患者）
环境：气溶胶采样膜（需裂解液预处理）
二、试剂盒组分与操作
1. 核心组分
组分 功能说明
RT-PCR预混液 含抗抑制剂逆转录酶、dUTP/UNG防污染系统（适配黏液样本）
探针引物组 HEF-FAM/NP-HEX探针，内标（人RNase P基因-Cy5）
阳性对照 灭活C/Yamagata-2025株（ATCC VR-1812）
核酸释放剂 含离液盐和蛋白酶K（拭子样本直接裂解，免提取）
2. 操作流程（以鼻咽拭子为例）
样本处理：
拭子头浸入200μL释放剂，涡旋10秒，室温裂解5分钟。
PCR扩增：
50℃ 15min（RT）→ 95℃ 3min → [95℃ 10s → 60℃ 30s]×45 cycles
结果判读：
HEF（FAM）Ct≤35 + NP（HEX）Ct≤35 → 阳性。
三、性能与质控
1. 关键参数
指标 性能标准
灵敏度 100%检出率（≥50拷贝/mL）
特异性 不与甲/乙型流感、RSV交叉反应
抗干扰性 耐受20%鼻腔分泌物或10%血液
2. 质控要求
每批次需包含：
1个阳性对照（Ct值偏差≤1.5）
1个阴性对照（无扩增）
1个内标孔（Cy5 Ct≤30）
四、注意事项
采样时效性
发病48小时内鼻咽拭子检出率＞95%，儿童样本建议深部采集。
局限性
不能区分活病毒与非感染性RNA（需结合抗原检测）。
生物安全
丙型流感病毒属BSL-2病原体，废弃物需121℃高压处理。
五、应用场景
临床诊断：
儿童急性呼吸道感染（发病率＜5%，但易合并中耳炎）。
流行病学监测：
养老院/学校聚集性疫情溯源。
疫苗研发：
HEF蛋白变异位点追踪（疫苗株匹配度评估）。