tCaMV35S基因检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
1. 检测原理：
产品名称 | tCaMV35S基因检测试剂盒（PCR-荧光探针法） | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1621 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
该试剂盒基于 TaqMan 荧光探针法 实时定量 PCR（qPCR）技术。
检测靶标：特异性扩增 CaMV 35S 启动子的保守基因片段。
荧光标记：
FAM 荧光基团：标记探针，用于检测目标基因（35S）。
内标通道（如 HEX/TAMRA）：部分试剂盒包含内源基因（如植物 18S rRNA 或特定物种基因）检测，用于监控 DNA 提取质量及反应体系是否正常，防止假阴性。
定量/定性：通过 Ct 值（循环阈值）判断样本中是否含有 35S 基因，并可依据标准曲线进行定量分析（如检测含量是否超过标识阈值）。
2. 试剂盒组成
以常见的 48 测试/盒规格为例，主要包含以下组分：
组分名称 主要功能 保存条件
PCR 反应液 (2×) 含 dNTPs、Mg2、缓冲液等 -20℃ 避光保存
引物/探针混合液 特异性识别 35S 基因序列 -20℃ 避光保存
阳性对照 (PC) 含 35S 基因片段的质粒或 DNA，用于验证试剂有效性 -20℃ 保存
阴性对照 (NC) 无菌水或缓冲液，用于监控环境及试剂污染 4℃ 或 -20℃ 保存
ROX 参比染料 校正荧光信号（视仪器型号而定） -20℃ 保存
3. 适用范围与背景
应用领域：食品安全检测、进出口检验检疫、饲料原料筛查、科研实验。
检测样本：大豆、玉米、油菜籽等植物源性食品及其加工制品（如食用油、蛋白粉）、饲料原料等。
检出限：通常灵敏度极高，最低检出限可达 0.1%（即能检测出含 0.1% 转基因成分的混合样品）。
4. 操作流程简述
样本前处理：取适量样品（如大豆粉），使用植物基因组 DNA 提取试剂盒提取总 DNA。
体系配置：在冰盒上操作，将反应液、引物探针、DNA 模板混合。
上机扩增：
仪器设置：选择 FAM 通道（Reporter Dye），淬灭基团通常为 TAMRA 或 None（视具体试剂盒设计而定）。
反应程序（典型参数）：
预变性：95℃ 10 min
扩增循环（40-45 cycles）：95℃ 15 sec → 60℃ 1 min（收集荧光）
结果判读：
阳性：扩增曲线呈典型的“S”型，Ct 值 ≤ 36（或阈值线穿过扩增曲线），且无非特异性扩增。
阴性：无扩增曲线，或 Ct 值 ≥ 40，曲线呈直线。
无效实验：若阳性对照未扩增或阴性对照出现扩增，则本次实验无效。
5. 关键注意事项
严格分区：PCR 检测对污染极其敏感，实验室必须严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），严禁物品交叉使用。
防污染：
操作时必须穿戴一次性手套、口罩和实验服。
严禁在扩增区打开扩增后的 PCR 管盖，以防气溶胶污染环境。
避免冻融：试剂盒组分对反复冻融敏感，建议按单次使用量分装保存，避免反复冻融超过 3 次。
光敏感：反应液中的荧光染料对光敏感，配制反应体系时应尽量避光操作。
总结
该试剂盒是转基因检测的“金标准”工具之一。如果你是实验室检测人员，请务必严格遵循说明书中的 Ct 值判定标准 和 实验室分区制度，以确保检测结果的准确性和可靠性。
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关键字： tCaMV35S基因;检测试剂盒;PCR-荧光探针法;
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