原理： 利用高温（通常为95℃-100℃）破坏细胞膜和病毒衣壳，使内部的RNA释放出来。同时，高温也能使大部分蛋白（包括降解RNA的酶）变性失活。
核心局限：
无保护环境： 普通水中含有RNase，且缺乏RNase抑制剂（如β-巯基乙醇、异硫氰酸胍等），提取出的RNA极易在煮沸后的冷却过程中被降解。
纯度低： 此法无法去除蛋白质、DNA和多糖等杂质，提取液通常呈浑浊状。
适用场景：
病毒检测： 针对结构稳定的病毒（如新冠病毒、肠道病毒），且后续检测手段灵敏度较高（如RT-PCR）。
粗提： 仅用于快速筛查，不适用于需要高纯度RNA的实验（如转录组测序、Northern Blot）。
2. 所谓的“提取液”是什么？
在“水煮法”中，所谓的“提取液”通常不是一种复杂的商业试剂，而是简单的缓冲液或纯水：
无菌双蒸水 (ddHO)： 最简单的提取液。
TE缓冲液 (Tris-EDTA)： 比水略好，Tris维持pH值，EDTA螯合金属离子，能在一定程度上保护核酸。
裂解缓冲液： 部分改良的“水煮法”会使用含SDS（十二烷基硫酸钠）或NaOH的溶液，这已接近“碱裂解法”，比单纯用水效果更好。
3. 标准操作流程 (简易版)
如果你必须使用水煮法提取RNA（例如在缺乏Trizol试剂的紧急情况下），请参考以下步骤：
样本采集：
细胞/组织： 取少量细胞沉淀或组织块（<10mg）放入无RNA酶的EP管中。
病毒/拭子： 将咽拭子/鼻拭子放入保存液中反复震荡洗脱。
洗涤（可选）： 加入PBS缓冲液洗涤一次，去除杂质，离心弃上清。
重悬： 加入 50-100 μL 无菌水 或 TE缓冲液。
水煮（裂解）：
将EP管放入沸水浴或金属浴中。
温度： 95℃ - 100℃。
时间： 5 - 10 分钟。
离心：
取出EP管，短暂离心（12000g，5分钟）。
此时管底会有白色沉淀（变性的蛋白和细胞碎片）。
取上清：
小心吸取上清液（约40-80 μL），转移至新的无RNA酶EP管中。
注意： 不要吸到管底的沉淀，沉淀中含有抑制PCR反应的杂质。
直接使用： 提取的上清液可直接作为模板用于RT-PCR或荧光定量PCR反应。
4. 关键注意事项
现提现用： 水煮法提取的RNA极其不稳定，必须在提取后立即进行PCR扩增，严禁长期保存。
容器要求： 必须使用经DEPC水处理或高压灭菌过的无RNA酶枪头和EP管。
抑制剂问题： 水煮法提取的液体中可能含有血红蛋白、肝素等PCR抑制剂，如果PCR结果异常，可能是提取液纯度不够。
与Trizol法对比： 如果你需要做定量PCR（qPCR）且要求数据精准，或者提取组织/细胞中的内源性基因表达，请务必使用Trizol法，不要使用水煮法。
5. 总结
所谓的“RNA提取液（水煮法）”本质上是利用高温物理裂解结合简单的水溶液来释放RNA。它是一种快速、粗放的前处理手段，优点是速度快、成本低；缺点是RNA易降解、杂质多。