检测目标：
pdmH1N1： 2009年甲型H1N1流感病毒（靶向血凝素HA基因）。
H3N2： 季节性甲型H3N2流感病毒（靶向血凝素HA基因）。
IAV通用： 部分试剂盒还会包含甲型流感通用通道，用于捕获所有甲型流感病毒。
主要应用：
临床诊断： 区分流感患者感染的具体亚型，辅助医生进行精准诊疗。
流行病学调查： 监测流感病毒在人群中的流行趋势和变异情况。
公共卫生应急： 流感样病例（ILI）的病原学监测。
2. 检测原理
该试剂盒采用一步法双重实时荧光定量RT-PCR（TaqMan探针法）技术：
双重检测： 在同一个PCR反应管中，同时加入两组针对不同亚型的特异性引物和探针。
荧光标记：
FAM通道（或类似）： 通常标记 pdmH1N1。探针被切断后释放FAM荧光信号。
VIC/HEX通道（或类似）： 通常标记 H3N2。探针被切断后释放VIC/HEX荧光信号。
内参/通用通道（可选）： 可能包含ROX或Cy5标记的内源性内参（IC），用于监控样本采集、提取和扩增过程是否正常。
结果判读： 仪器实时监测不同通道的荧光信号增长情况，从而判断样本中是否含有pdmH1N1、H3N2或两者共感染。
3. 试剂盒组成 (以50测试规格为例)
组分名称 规格 保存条件 功能说明
双重荧光PCR反应液 500 μL x 2管 -20℃避光 含dNTPs、缓冲液、Mg2、引物、探针
酶混合液 (Enzyme Mix) 50 μL x 1管 -20℃ 含逆转录酶、Taq酶、UNG酶（防污染）
阳性对照 (PC) 50 μL x 1管 -20℃ 含pdmH1N1和H3N2目的基因的质粒混合物
阴性对照 (NC) 250 μL x 1管 4℃或-20℃ 无菌生理盐水或缓冲液
说明书 1份 常温 操作指南及判读标准
4. 样本要求与处理
样本类型：
呼吸道样本： 鼻咽拭子、咽拭子、鼻咽抽取物、肺泡灌洗液（BALF）。
其他： 细胞培养上清（如有）。
样本保存：
采集后应立即放入病毒采样管（含保存液）中。
短期（24小时内）可保存于2-8℃；长期保存需置于-70℃冰箱（避免反复冻融）。
核酸提取：
需使用配套的病毒RNA提取试剂盒（磁珠法或柱提法）进行提取。
提取后的RNA应尽快用于检测，或保存于-80℃。
5. 操作流程详解
第一步：试剂准备 (试剂准备区)
解冻： 将反应液和酶混合液从-20℃取出，置于冰上融化，振荡混匀，瞬时离心。
配制： 按照说明书比例（如19 μL反应液 + 1 μL酶液）混合，分装到PCR反应管中（通常每管20 μL）。
第二步：加样 (样本制备区)
向上述反应管中加入 5 μL 模板RNA（或cDNA）。
设置对照：
空白对照： 加入5 μL无菌水（监测环境/试剂污染）。
阴性对照： 加入阴性对照品。
阳性对照： 加入阳性对照品（通常最后加，防止气溶胶污染）。
第三步：PCR扩增 (扩增区)
仪器设置： ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96等。
通道设置：
Reporter Dye: FAM (pdmH1N1), VIC/HEX (H3N2)
Quencher Dye: None
Passive Reference: ROX (根据仪器要求选择)
反应程序（参考）：
逆转录： 42℃-50℃ 10-15 min (1 cycle)
预变性： 95℃ 2-5 min (1 cycle)
PCR扩增： 95℃ 15 sec → 60℃ 30-45 sec (40-45 cycles，采集荧光)
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