NPTII基因检测试剂盒（恒温荧光法）
试剂简介：
1. 检测原理
该试剂盒采用环介导等温扩增技术（LAMP）：
特异性识别： 针对NPTII基因的特定区域设计4-6条特异性引物，识别靶序列上的6-8个位点。
恒温扩增： 在60℃-65℃的恒定温度下，利用链置换DNA聚合酶（Bst酶）进行核酸扩增。
产品名称 | NPTII基因检测试剂盒（恒温荧光法） | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1640 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
荧光/浊度判读：
荧光法： 反应体系中加入荧光染料（如SYTO-9或钙黄绿素），扩增过程中产生的焦磷酸镁沉淀会与染料结合发出荧光，或通过pH值变化引起颜色改变。
肉眼观察： 扩增阳性样本会产生大量白色焦磷酸镁沉淀，肉眼可见反应管变浑浊。
2. 试剂盒组成
以常见的50测试规格为例：
组分名称 规格 保存条件 功能说明
反应液 (Rehydration Buffer) 干粉或液体 -20℃或4℃ 含dNTPs、缓冲液、甜菜碱等
酶混合液 (Enzyme Mix) 适量 -20℃ 含Bst DNA聚合酶
阳性对照 (Positive Control) 1管 -20℃ 含NPTII基因片段的质粒或阳性样本
阴性对照 (Negative Control) 1管 4℃ 无菌双蒸水
显色剂/荧光染料 (可选) 4℃避光 用于肉眼观察颜色变化
3. 操作流程详解
第一步：样本DNA提取 (样本制备区)
样本类型： 植物叶片、种子、食品粉末、饲料等。
提取方法： 使用CTAB法、商业化植物基因组DNA提取试剂盒，或简易的煮沸法（适用于LAMP快检）。
简易煮沸法： 取少量组织加入裂解液，100℃煮沸5-10分钟，离心取上清即可。
第二步：反应体系配制 (加样区)
解冻： 将反应液和酶混合液在冰上解冻，涡旋混匀并瞬时离心。
配制： 按说明书比例混合反应液、酶液和蒸馏水。
分装： 将混合液分装至PCR八联管或反应管中。
第三步：加样
向上述反应管中分别加入 模板DNA（通常为2-5 μL）。
设置对照：
空白对照： 加入等量无菌水。
阴性对照： 加入阴性样本。
阳性对照： 加入阳性对照品。
第四步：恒温扩增 (扩增区)
仪器设置： 恒温金属浴、水浴锅或便携式恒温荧光检测仪。
反应条件： 63℃ ± 1℃，恒温反应 30-60分钟。
终止反应： 部分试剂盒需要在80℃灭活酶以终止反应。
第五步：结果观察
荧光检测仪： 观察荧光曲线是否呈指数上升，或读取终点荧光值。
肉眼观察（终点法）：
阳性： 溶液呈现绿色荧光（如使用SYBR Green）或明显的浑浊/白色沉淀。
阴性： 溶液保持橙色/红色（如使用钙黄绿素）或澄清透明。
4. 结果判定标准
阳性 (+)：
荧光曲线呈明显的指数增长。
或肉眼观察反应液变绿（或变黄/浑浊，视具体染料而定）。
表明样本中含有NPTII基因，即含有转基因成分。
阴性 (-)：
无荧光信号增长。
或肉眼观察反应液颜色无变化（保持橙色/红色）且澄清。
表明样本中未检测到NPTII基因。
无效：
阳性对照无扩增（颜色未变或无荧光），说明试剂失效或操作失误。
5. 注意事项
防污染（重中之重）： LAMP法灵敏度极高，且扩增产物量大，极易产生气溶胶污染。严禁在加样区打开扩增后的管盖。建议使用带防污染膜的离心管。
设备要求低： 该方法不需要昂贵的PCR仪，只要有恒温金属浴或水浴锅即可操作，非常适合现场检测。
快速出结果： 相比PCR法通常需要1.5-2小时，恒温荧光法通常在30-45分钟内即可出结果。
保存条件： 酶混合液对温度敏感，使用后应立即放回-20℃冰箱，避免反复冻融。
仅限科研/检测： 该试剂盒仅供科研实验或特定检测使用，不得用于临床医疗。
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