N9 亚型流感病毒检测试剂盒
试剂简介:
1. 检测原理
该试剂盒基于 TaqMan 荧光探针法(Real-time RT-PCR)。
逆转录(RT): 由于流感病毒是 RNA 病毒,试剂盒首先利用逆转录酶将样本中的病毒 RNA 逆转录成 cDNA。
特异性扩增: 针对 N9 亚型流感病毒基因组的高度保守区域设计特异性引物和探针。
荧光检测: 在 PCR 扩增过程中,探针被切断释放荧光信号。仪器实时监测荧光信号的变化,通过扩增曲线和 Ct 值来判断样本中是否含有 N9 亚型病毒。
产品名称 | N9 亚型流感病毒检测试剂盒 | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1642 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
2. 检测目标与应用
目标基因: 禽流感病毒 N9 亚型(AIV-N9)特异性基因片段。
应用领域:
动物防疫: 用于家禽(鸡、鸭、鹅等)养殖场的日常监测和疫情排查。
临床辅助诊断: 用于疑似禽流感感染禽类的辅助诊断。
环境监测: 用于活禽交易市场、运输工具等环境样本(如污水、粪便)的检测。
样本类型: 咽喉拭子、泄殖腔拭子、血液、肺脏、脾脏等组织匀浆液。
3. 试剂盒组成(典型配置)
根据常见品牌的配置,试剂盒通常包含以下组分:
组分名称 规格/含量 作用
RT-PCR 反应液 14-17.5 μL/次 含 dNTPs、缓冲液、Mg2等
酶混合液 (Enzyme Mix) 1-2.5 μL/次 含逆转录酶、热启动 Taq 酶
阳性对照 (Positive Control) 50 μL/管 含 N9 亚型靶基因的质粒或灭活病毒
阴性对照 (Negative Control) 50 μL/管 无菌双蒸水或缓冲液
说明书 1 份 操作指南和参数说明
注:部分试剂盒可能包含内标(Internal Control),用于监控提取和扩增过程。
4. 操作流程简述
样本处理: 采集拭子或组织样本,使用病毒 DNA/RNA 提取试剂盒提取病毒 RNA。
试剂配制(冰上操作): 按照说明书比例(如 N+2 法,N 为样本数)混合反应液和酶,分装到 PCR 管中。
加样: 向分装好的反应管中分别加入 5-10 μL 的模板 RNA(样本、阴性对照、阳性对照)。
上机扩增: 将 PCR 管放入荧光定量 PCR 仪中。
5. 反应程序与结果判读
推荐反应程序:
逆转录: 50℃,2-15 分钟(部分试剂盒为一步法,此步可省略或合并)。
预变性: 95℃,5-10 分钟。
PCR 循环: 95℃ 15 sec → 60℃ 30-45 sec(收集荧光),40-45 个循环。
结果判读标准:
阳性(+):
扩增曲线呈典型的 S 型。
Ct 值 ≤ 35(或说明书设定的阈值,通常为 35-38)。
结论:样本中检出 N9 亚型流感病毒核酸。
阴性(-):
无 Ct 值,或 Ct 值 > 35(或无扩增曲线)。
结论:样本中未检出 N9 亚型流感病毒核酸。
可疑(±):
Ct 值在 35-40 之间。建议重新检测,若复检 Ct 值 < 40 且曲线正常,判为阳性。
实验有效性:
阳性对照: 必须有明显扩增(Ct 值在预期范围内)。
阴性对照: 必须无扩增(无 Ct 值)。
6. 注意事项与局限性
防污染: PCR 检测极其灵敏,极易受气溶胶污染。严禁在检测区打开扩增后的 PCR 管盖。实验需分区(试剂准备区、样本制备区、扩增区)进行。
试剂保存: 试剂盒通常需在 -20℃ 条件下避光保存。运输和使用过程中应尽量避免反复冻融,以免影响酶活性。
样本质量: 样本采集部位(如咽喉、泄殖腔)的准确性直接影响检测结果。样本若不能立即检测,应置于 -70℃ 保存。
临床诊断: 本试剂盒仅用于临床辅助诊断,不作为确诊唯一依据。检测结果需结合禽类的临床症状、病理变化及其他检测结果综合判断。
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