N7 亚型流感病毒检测试剂盒
试剂简介：
产品名称： 流感病毒N7亚型检测试剂盒（通常为荧光PCR法或RT-PCR法）。
检测目标： 甲型流感病毒的N7基因（神经氨酸酶N7亚型）。
产品名称 | N7 亚型流感病毒检测试剂盒 | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1644 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
主要应用：
人医临床： 辅助诊断由H7N7或H7N9等病毒引起的流感样症状，特别是针对有禽类接触史的患者。
动物防疫/兽医： 检测家禽（鸡、鸭）或猪群中的禽流感病毒，进行流行病学监测。
环境监测： 检测活禽市场、养殖场环境样本（如污水、笼具擦拭物）中的病毒。
检测意义： N7亚型常与高致病性禽流感相关，快速检测有助于疫情的早期预警和防控。
2. 检测原理
该类试剂盒主要采用实时荧光定量RT-PCR（探针法）：
逆转录（RT）： 由于流感病毒是RNA病毒，试剂盒首先利用逆转录酶将样本中的病毒RNA反转录成cDNA。
特异性扩增： 针对N7基因的高度保守区域设计特异性引物和TaqMan探针。
荧光检测： 在PCR扩增过程中，荧光探针被切断，释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的增加，从而判断样本中是否存在N7亚型流感病毒核酸。
3. 试剂盒组成
以常见的50次/盒规格为例，试剂盒通常包含以下组分：
组分名称 规格/体积 保存条件 功能说明
PCR反应液 含引物、探针、dNTPs -20℃避光 核心反应成分，通常已预混
酶混合液 含逆转录酶、Taq酶 -20℃ 催化逆转录和PCR扩增反应
阳性对照 1管 -20℃ 含N7基因片段的质粒或假病毒，用于验证试剂有效性
阴性对照 1管 4℃或-20℃ 无菌生理盐水或缓冲液，用于监控污染
ROX参比染料 (可选) -20℃ 部分试剂盒包含，用于校正仪器误差
4. 样本要求与操作流程
第一步：样本采集
人医样本： 鼻咽拭子、口咽拭子、痰液、肺泡灌洗液。
兽医/环境样本： 喉气管拭子、泄殖腔拭子、病死禽的脏器组织（如脾、肺）、环境涂抹样。
保存： 采集后立即放入病毒采样管，2-8℃保存并尽快送检；长期保存需置于-70℃。
第二步：核酸提取 (关键步骤)
方法： 需使用配套的病毒RNA提取试剂盒（如磁珠法或柱提法）。
注意： RNA极易降解，操作过程应在冰上进行，并使用无RNase的耗材。
第三步：PCR反应体系配制
解冻： 将反应液和酶液在冰上解冻，振荡混匀并瞬时离心。
配制： 按说明书比例混合反应液、酶液和ROX（如需）。
分装： 将混合液分装至PCR反应管中。
第四步：加样
向反应管中加入提取好的RNA模板（通常为5-10 μL）。
设置阴性对照和阳性对照。
第五步：上机扩增
仪器： ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96等。
程序（参考）：
逆转录：42℃-50℃，10-15分钟。
预变性：95℃，3-5分钟。
PCR循环：95℃变性15秒，60℃退火/延伸30-45秒（采集荧光），共40-45个循环。
5. 结果判读标准
有效实验判定：
阴性对照： 无Ct值，无扩增曲线。
阳性对照： Ct值 ≤ 35，扩增曲线呈典型的“S”型。
样本结果判定：
阳性 (+)： Ct值 ≤ 35，且扩增曲线呈明显的“S”型。表明样本中检测到N7亚型流感病毒核酸。
阴性 (-)： Ct值 > 38 或 无Ct值。表明样本中未检测到N7亚型流感病毒。
可疑 (灰区)： Ct值在 35-38之间。
建议：重新提取核酸或复测。若复测Ct值 < 38且曲线正常，则判为阳性；否则判为阴性。
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