中国仓鼠卵巢细胞;CTLA4 LG-24
产品信息:

1. 细胞基本特性
别名:CTLA4 IG-24, CTLA4-Ig-24
种属来源:中国仓鼠(Cricetulus griseus)
组织来源:卵巢
细胞形态:上皮细胞样(多边形)
生长特性:贴壁生长
背景简介:该细胞系构建的目的是为了表达 CTLA4-Ig 融合蛋白。这种蛋白可以阻断 T 细胞活化所需的 B7-CD28 共刺激信号,在免疫学研究中具有重要价值。
生物安全等级:1级
产品名称 | 中国仓鼠卵巢细胞;CTLA4 LG-24 | 英文名称 | CTLA4 LG-24:CTLA4LG24 |
货号 | AXB10563 | 生长特性 | 贴壁生长 |
核心参数速览

特征 描述
培养基 DMEM (高糖) + 10% FBS + 双抗
特殊添加物 0.001 mM 氨甲蝶呤 (MTX)、0.2 mM 脯氨酸
培养条件 37℃, 5% CO, 95% 空气
传代比例 1:2 ~ 1:5
倍增时间 约 14-18 小时 (生长较快)
3. 详细培养操作指南

基础培养基配置
CTLA4 Ig-24 对培养基成分有一定要求,建议严格按照以下配方配置完全培养基:
基础培养基:DMEM (高糖,Dulbecco's Modified Eagle Medium),占 89%。
血清:优质胎牛血清 (FBS),占 10%。
双抗:青霉素-链霉素溶液 (P/S),占 1%。
关键添加剂:
氨甲蝶呤 (MTX):终浓度 0.001 mM(用于筛选和维持转染基因的稳定性)。
脯氨酸:终浓度 0.2 mM(部分培养基配方要求)。
传代操作 (当细胞密度达 80%-90% 时)
弃液:吸去旧的培养上清液。
润洗:加入适量不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液,轻轻晃动润洗细胞层 1-2 次,弃去 PBS。
消化:加入 0.25% 胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 消化液(T25 瓶加 1-2 mL),置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟。
终止:在显微镜下观察,待细胞大部分变圆并脱落时,加入含血清的完全培养基终止消化。
离心:将细胞悬液转移至离心管,1000 rpm (约 100-200g) 离心 3-5 分钟。
重悬与分装:弃上清,加入新鲜完全培养基重悬细胞,按 1:2 至 1:5 的比例分装到新的培养瓶中。
冻存与复苏
冻存液:推荐使用 90% FBS + 10% DMSO,或专用的无血清冻存液。
冻存密度:建议密度为 1×10 ~ 1×10 个活细胞/mL。
复苏:37℃ 水浴快速摇晃解冻,立即转移至含完全培养基的离心管中混匀,离心去除上清(去除 DMSO),重悬后接种。
4. 注意事项与常见问题

运输培养基(灌液培养基):
收到细胞后,运输用的培养基通常不再适合继续培养(可能含有抑制剂或代谢废物),请务必离心去除,并用新鲜配制的完全培养基重悬接种。
细胞脱落问题:
由于运输震动,部分贴壁不牢的细胞可能会漂浮。请将漂浮的细胞离心收集,重悬后打入原培养瓶中,不要丢弃。
MTX 的作用:
氨甲蝶呤(MTX)是筛选压力的关键。长期培养中若不添加 MTX,可能会导致外源基因(CTLA4-Ig)的表达丢失或细胞特性改变。
蛋白表达:
该细胞的主要功能是表达 CTLA4-Ig 融合蛋白。在进行相关实验时,建议通过 ELISA 或 Western Blot 验证上清液中的蛋白表达水平。
总结:CTLA4 Ig-24 是一种生长迅速的贴壁细胞,培养难度中等。关键在于维持培养基中 MTX 的浓度以保证融合蛋白的稳定表达。
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细胞具体特点如下:

环境与营养:需无菌环境、精确的温度(36-37℃)和pH(7.2-7.4),动物细胞常需血清,植物细胞需激素。
生长方式:贴壁细胞需表面附着,悬浮细胞自由漂浮,半贴壁半悬浮兼具两者特性。
传代与密度:贴壁细胞需胰酶消化传代,悬浮细胞直接分瓶;密度达80%-90%时需传代,避免营养枯竭与代谢抑制。
敏感性:对剪切应力、污染、温度变化敏感,需定期更换培养液清除代谢物。
应用与局限:便于活细胞观察与实验控制,但体外环境与体内存在差异,长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。
关键字: CTLA4 LG-24;中国仓鼠卵巢细胞;贴壁细胞;
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