磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
PEPC(EC 4.1.1.31 )广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,是催化磷酸烯醇式丙酮酸与二氧化碳反应生成草酰乙酸呈不可逆反应的酶,对三羧酸循环的运转起重要调节作用。
测定原理:
PEPC 催化磷酸烯醇式丙酮酸和 CO2 生成草酰乙酸和 HPO42- ,苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和 NADH生成苹果酸和 NAD+ ,在 340nm 测定 NADH 减少速率,计算 PEPC 活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。测定操作:
加样表:
试剂名称(μL)
测定管
试剂一
500
试剂二
150
试剂三
试剂四
95
试剂五工作液
样本
20
将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,立即混匀,加样本的同时开始计时,340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和反应 5 分钟后的吸光度 A2 。计算 ΔA=A1-A2。
注 意:
如果一次性测定样本数较多,可将试剂一、二、三、四、和试剂五工作液按比例配成混合液。
上海酶联生物科技有限公司
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