辅酶ⅠNAD(H)含量测定试剂盒/分光光度法/24样

辅酶ⅠNAD(H)含量测定试剂盒/分光光度法/24样

测定意义：

辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循环（TCA）的主要氢受体，生成的 NADH  经呼吸电子链（ETC）传递把电子交给氧， 在合成 ATP   的同时，形成大量的 ROS ，同时 NADH  再生为 NAD+ 。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和 TCA  循环的强弱。较高的 NAD(H)及 NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA  循环。另外，NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。

测定原理：

分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NAD+和 NADH ，NADH  通过 PMS   的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT）为甲瓒，在 570nm   下检测吸光值；而 NAD+可被乙醇脱氢酶还原为 NADH，进一步采用 MTT  还原法检测。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 mL  玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：
加样表(在 1.5mL  棕色 EP   管中按下表依次加样）：

充分混匀，静置 5min  后，20000g ，25℃离心 5min，弃上清，沉淀中加入： 

注 意：

正式测定前务必取 2-3  个预期差异较大的样本做预测定。