肉毒碱棕榈酰转移酶(CPT1)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
肉毒碱棕榈酰转移酶是存在于线粒体内膜的一类酰基转移酶。可逆地催化从酰基辅酶 A 将酰基转移至 L-肉毒碱的反应,在转运脂肪酸通过线粒体内膜的过程中起重要作用。
测定原理:
基于肉碱和脂酰辅酶 A 在丙二酰辅酶 A 存在与否的条件下,通过肉碱脂酰转移酶(CPT-I)的作用,产生脂酰肉碱,并释放出巯基辅酶 A(COA-SH) ,与 Ellman 试剂 DN-TB 反应后,产生黄色的 TNB。通过其吸收峰值得变化(412nm),来定量分析 CPT-1 的活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水。
测定操作:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
(1)在试剂五中加入 1mL 无水乙醇,混匀,再加入 22mL 试剂四,混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)孵育 5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
(2)在试剂六中加入 1mL 蒸馏水,混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)孵育 5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
(3)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、220μL 试剂五和 10μL 试剂六,混匀,记录 412nm处 20 秒时的初始吸光度 A1 和 2 分 20 秒时的吸光度 A2 ,计算 ΔA=A2-A1。
注 意:
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
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