ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测定试剂盒/分光光度法/48样

ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测定试剂盒/分光光度法/48样

测定意义：

ACL（EC4.1.3.8）是脂肪酸合成中的关键酶，其催化产生的乙酰辅酶 A 可用于脂肪酸合成和碳链延长、黄酮类物质合成、氨基酸合成等。

测定原理：

ACL 在 ATP 和辅酶 A 存在的情况下催化柠檬酸裂解为乙酰辅酶 A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸盐。苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和 NADH 生成苹果酸和 NAD+，在 340nm 测定 NADH 减少速率，计算 ACL活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

测定操作：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

（1）工作液的配置，将试剂二和试剂三转移至试剂一中，充分混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃ （其它物种）水浴 5min；（注意：可取少量试剂一至试剂二和试剂三中，充分混匀溶解后转移至试剂一瓶中，重复 2-3 遍）；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

（2）在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 样本和950μL 工作液，混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1和 2min20s 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。