磷脂酶D(PLD)测定试剂盒/微量法/96S
测定意义:
磷脂酶 D(EC3.1.4.4 )即磷脂酰胆碱水解酶,是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称,广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中,具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。
测定原理:
磷脂酶 D 催化水解磷脂酰胆碱末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和胆碱,胆碱在胆碱氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢,过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将 4-氨基安替比林和重蒸酚氧化成粉红色物质,在500nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅、无水乙醇。测定操作:
空白管
标准管
测定管
试剂一 (μL)
20
试剂二(μL)
30
标准品(μL)
样品(μL)
试剂三(μL)
10
充分混匀,30℃反应 30min ,沸水浴 1min,打开盖子, 自然冷却 2min。
试剂四(μL)
140
30℃反应30min,于微量石英比色皿/96 孔板,空白管调零,测定 500nm 处吸光值,分别记为 A 标准管和 A测定管。
注 意:
1. 显色完成后,若有沉淀,于 8000rpm ,25℃离心 5min 后取上清测定。
2. 吸光值不宜超过 1,否则用试剂一将酶液进行稀释,并在计算公式中乘以稀释倍数。
上海酶联生物科技有限公司
联系商家时请提及chemicalbook,有助于交易顺利完成!