酰基转移酶(AAT)测定试剂盒/分光光度法/24样
测定意义:
AAT 是一个多功能蛋白大家族,主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应,在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。
测定原理:
AAT 催化乙酰 CoA 转移乙酰基到丁醇,释放的 CoA 还原 DTNB 生成 TNB ;TNB 在 412nm 有吸收峰,测定 412 nm 吸光度增加速率可计算 AAT 活性。
自备仪器和用品:
研钵、冰、台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅、无水乙醇。
AAT 测定操作:
1、分光光度计预热 30min ,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零。
2、工作液的配制:临用前在试剂二瓶中加入 22.5mL 试剂一,充分混匀待用。用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
3、试剂三的配制:临用前加无水乙醇 1.25mL 充分溶解待用,用不完的试剂 4℃保存。
4、空白管:在 Ep 管或 96 孔板中加入 50μL 提取液和 900μL 工作液,充分混匀,35℃反应 15min,加入 50μL试剂三,充分混匀,25℃静置 10min ,测定 412nm 处吸光值,记为 A 空白管。
5、测定管:在 Ep 管或 96 孔板中加入 50μL 样本和 900μL 工作液,充分混匀,35℃反应 15min,加入 50μL试剂三,充分混匀,25℃静置 10min ,测定 412nm 处吸光值,记为 A 测定管。△A=A 测定管- A 空白管,空白管只要做一管。
注 意:
正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
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