人胚皮肤成纤维细胞；HES

人胚皮肤成纤维细胞；HES

商品属性

英文名称：Human Embryonic Skin Fibroblast Cell Line, HES (STR authenticated)

来源：取自3-5个月龄人胚胎背部皮肤组织，经原代消化（胶原酶+胰酶联合消化）和差速贴壁纯化获得，STR鉴定位点包括Amelogenin、D3S1358、TH01等，与已知人皮肤成纤维细胞图谱匹配。

核心特征：

形态与生长：典型长梭形成纤维细胞样，贴壁生长，呈“鱼群状”或“漩涡状”排列，增殖能力强（倍增时间约24-30小时）

功能特性：分泌胶原蛋白（Ⅰ型、Ⅲ型）、弹性蛋白及基质金属蛋白酶（MMP-1/2），可参与伤口愈合模拟

核型：正常二倍体（46,XX/XY），无致瘤性（软琼脂克隆形成实验阴性）

培养条件

培养基 DMEM/F12（1:1） + 10%胎牛血清 + 1%双抗（青霉素/链霉素）

培养环境 37℃、5% CO₂、湿度70%-80%

传代方法 1:3-1:4传代（细胞融合度达80%时操作）：

1. PBS润洗2次，0.25%胰酶-EDTA（含0.02% EDTA）消化2-3分钟

2. 镜下观察60%-70%细胞变圆后加完全培养基终止（培养基:胰酶 = 2:1）

3. 轻柔吹打5-8次，1000rpm离心5分钟，重悬后接种新培养瓶

冻存液 90% FBS + 10% DMSO（现配）或无血清冻存液

研究应用

HES因保留胚胎期皮肤成纤维细胞的高活性，主要用于：

皮肤发育与修复模型：

构建体外“三维皮肤等效物”（与角质形成细胞共培养），模拟胚胎皮肤发育过程

研究创面愈合机制：通过检测α-SMA表达评估成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

皮肤病理研究：

特应性皮炎模型：LPS刺激后检测IL-6、TNF-α等炎症因子分泌

瘢痕形成机制：TGF-β1诱导下观察胶原蛋白合成与排列变化

再生医学应用：

干细胞旁分泌研究：与间充质干细胞共培养，评估其对HES增殖和迁移的影响

生物材料相容性测试：检测胶原支架、透明质酸等材料对细胞活性的影响

关键操作注意事项

原代细胞特性维持：

避免过度消化：胰酶消化时间不超过3分钟，否则易导致细胞损伤和功能丢失

低血清适应：长期实验可逐步将血清浓度降至5%，减少血清批次差异对结果的影响

污染防控重点：

皮肤组织易携带真菌，原代培养前需用0.1%氯己定浸泡组织块10分钟

传代过程中严格无菌操作，建议每3代检测一次支原体

功能实验优化：

划痕实验：细胞接种密度达90%融合时划痕，用无血清培养基培养以排除血清对迁移的影响

胶原合成检测：添加50μg/mL抗坏血酸可显著提高胶原蛋白分泌量

操作指南

接收处理：

75%酒精消毒培养瓶外壁，静置2~4小时后观察汇合度。

若汇合度＜80%，补充6mL完全培养基继续培养；若≥80%，按步骤传代。

复苏步骤：

37℃水浴解冻，离心后重悬于4~6mL完全培养基，过夜培养后换液。

传代步骤：

使用0.25%胰酶-EDTA消化1~2分钟，完全培养基终止消化，按比例分装。
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