人胚肾细胞； GP293 (STR) 新品

人胚肾细胞； GP293 (STR)

商品属性

英文名称：Human Embryonic Kidney Cell Line, GP293 (STR authenticated)

来源：HEK293细胞衍生株，经SV40大T抗原基因稳定转染，已通过STR分型鉴定（位点含Amelogenin、D3S1358、TH01等，与ATCC标准图谱匹配）。

核心特征：

形态与生长：上皮细胞样，贴壁生长（贴壁能力较弱），呈“岛状聚集”或“铺路石样”排列

增殖特性：倍增时间约24-30小时，可无限传代（永生化），核型为亚二倍体

功能优势：高表达SV40 T抗原，支持带有SV40复制起点的质粒高效复制，转染效率可达70%-90%

培养条件

培养基 DMEM高糖培养基（含4.5g/L葡萄糖）+ 10%胎牛血清 + 1%双抗（青霉素100U/mL + 链霉素100μg/mL）

培养环境 37℃、5% CO₂、湿度70%-80%

传代方法 1:2-1:3传代（细胞密度达80%时操作）：

1. 弃上清，PBS（无钙镁）润洗1次

2. 加入0.25%胰酶-EDTA（1mL/T25瓶），37℃消化30秒-1分钟（贴壁弱，消化时间短）

3. 镜下观察50%细胞变圆后，加入完全培养基终止（按胰酶体积1:2加入）

4. 轻柔吹打制成单细胞悬液，1000rpm离心5分钟，重悬后接种新培养瓶

冻存液 90% FBS + 10% DMSO（现配现用），推荐程序降温（-80℃过夜后转入液氮）

研究应用

GP293因转染效率高、易培养，广泛用于：

病毒载体生产：

慢病毒、腺病毒包装（如第三代慢病毒系统psPAX2/VSV-G共转染）

逆转录病毒滴度测定（空斑实验或流式检测GFP阳性率）

重组蛋白表达：

瞬时转染表达外源蛋白（如FLAG/HA标签蛋白），48-72小时收获细胞

稳定细胞株构建（通过G418或嘌呤霉素筛选）

基因功能研究：

CRISPR-Cas9基因编辑（推荐使用电转染提高敲除效率）

启动子活性分析（双荧光素酶报告基因实验）

培养特性

传代比例：1:2至1:4（首次建议1:2）

培养基：DMEM（高糖）+10%胎牛血清（FBS）+1%双抗（青霉素/链霉素）

生长条件：37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱。

质量控制

无菌检测：阴性（细菌、真菌、支原体）。

细胞活力：≥90%（台盼蓝染色法）。

运输与保存

运输形式：冻存管（1.5 mL，含1×10⁶ cells/vial）或贴壁培养的T25瓶。

保存条件：液氮长期储存或-80℃短期保存（需使用专用冻存液）。

注意事项

悬浮转染效率较低，建议采用脂质体或电穿孔法优化转染条件。

传代时避免过度消化（胰酶作用时间≤2分钟）。
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