核苷酸(ATP、ADP、AMP)含量测定试剂盒(高效液相色谱法)/48S

核苷酸(ATP、ADP、AMP)含量测定试剂盒(高效液相色谱法)/48S

中文名称  ：核苷酸(ATP、ADP、AMP)含量检测试剂盒

英文名称  ：ATP、ADP、AMP Content HPLC Assay Kit

产品包装  ：盒装

产品规格 ： 50T/48S

储存条件 ： -20℃

检测方法  ：高效液相色谱法

有 效 期  ：6 个月

产品简介：
核苷酸具有重要的生物学功能 ，是一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物 ，主要参与构成核苷。三磷酸腺苷(ATP)被认为是一种在所有生物体生存和繁殖的细胞合成中必不可少的普遍能量来源。ATP 可通过多种细胞途径产生。

典型的如在线粒体中通过氧化磷酸化由三磷酸腺苷合酶合成，或者在植物的叶绿体中通过光合作用合成。ATP 合成的主要能源为葡萄糖和脂肪酸。

二磷酸腺苷(ADP)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。在生物体内 ，通常为三磷酸腺苷(ADP)水解失去一个磷酸根 ，即断裂一个高能磷酸键 ，并释放能量后的产物。

一磷酸腺苷(AMP)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是在机体内由 ATP 与 AMP释放能量之后形成的。可以继续结合磷酸基团形成二磷酸腺苷(AMP)和三磷酸腺苷(ATP)。是 ATP 不完全水解的产物。ATP、ADP、AMP 在 254nm 下有吸收峰 ，可以利用高效液相色谱法根据不同的出峰时间和峰面积来测定不同核苷酸含量。
试验中所需的仪器和试剂  ：高效液相色谱仪(C18 柱(4.6 ×250mm) ，紫外检测器(VWD))、台式离心机、可调式移液枪、研钵/匀浆器、棕色 EP 管、针头式过滤器(50 个，水系，0.45µm)，注射器，抽滤器，滤膜(有机系、水系)，棕色进样瓶(50 个 ，2mL)、乙腈(色谱纯 ，500mL)、超纯水。

核苷酸的的提取：

1. 组织样本 ：按照组织质量(g) ：提取液一体积(mL)1:5~10 的比例(建议称取 0.3g 组织样本 ， 加入 1.5mL 提取液)加入提取液一 ， 冰浴匀浆 ，然后冰浴浸提 40min 。4℃条件下10000rpm 离心 10min，取上清液 750μL，加入 750μL 的提取液二，充分震荡(5min)混匀后 ，再次在 4℃条件下 10000rpm 离心 10min。取上清液 ，采用水系针头式过滤器过滤到棕色进样瓶内置常温待测(2h 之内)。

2. 细胞样本 ：按照 1000 万(个) ：提取液一体积(mL)1000~500:1 的比例(建议取 1000 万细胞样本 ，加入 1mL 提取液一)加入提取液一 ，冰浴超声波破碎细胞(功率 300W ，超声 3秒 ，间隔 7 秒 ，总时间 3min) ；于 4℃,10000rpm 离心 10min ，取 0.75mL 上清液 ，再加入 0.75mL 提取液二，充分震荡(5min)混匀后，再次在 4℃条件下 10000rpm 离心 10min。取上清液 ，采用水系针头式过滤器过滤到棕色进样瓶内置常温待测(2h 之内)。

3. 血清：建议称取 0.4mL 血清样本，加入 0.6mL 提取液一，冰浴浸提 40min。4℃条件下10000rpm 离心 10min ，取上清液 0.75mL ，加入 0.75mL 的提取液二 ，充分震荡(5min)混匀后 ，再次在 4℃条件下 10000rpm 离心 10min ，取上清液 ，采用水系针头式过滤器过滤到棕色进样瓶内置常温待测(2h 之内)。

注 意：
1. 测试完毕后 ，需要用高浓度的超纯水相冲洗色谱柱(约 20-30 个柱体积) ，以防阻塞色谱柱 ，按柱子的种类规范冲洗 ，防止损伤色谱柱。

2. 标准品的稀释倍数要根据样品中不同核苷酸的浓度确定 ，样品中不同核苷酸的峰面积必须在其对应的不同浓度的标准品溶液的峰面积之内，该标准品的稀释倍数只是一个参考。若样本中某一种核苷酸浓度过高 ，建议可稀释后再测。

3. 建议采用鲜样进行提取，提取后样品中的 ATP、ADP、AMP 在室温不太稳定，需尽快操作。