细胞壁不溶性酸性转化酶(B-AI)测定试剂盒/分光光度法/24样
测定意义:
蔗糖转化酶(Invertase ,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH ,Ivr 分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。
AI 的最适 pH 为 3~5 。AI 分为可溶性 AI(S-AI)和细胞壁不溶性 AI(B-AI)两种类型。B-AI 存在于细胞间隙并结合在细胞壁上,主要参与韧皮部质外体卸载时蔗糖的分解,以维持库源之间蔗糖的浓度。
测定原理:
B-AI 催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 510nm 有特征光吸收,在一定范围内 510nm 光吸收增加速率与 B-AI 活性成正比。
需自备的的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。测定步骤和加样表:
试剂名称(μL)
测定管
对照管
样本
200
试剂一
800
试剂二
混匀, 37℃准确水浴 30min 后,95℃水浴 10min(盖紧,以防水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)
试剂三
500
混匀,95℃水浴 10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀, 510nm 处,蒸馏水调零,记录各管吸光值 A ,如果吸光值大于 2 ,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数) ,ΔA=A 测定-A 对照。
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
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