乙酸(acetic acid)含量测定试剂盒/48样
产品简介：
乙酸（Acetic acid）在食品、饮料和其他材料中的普遍存在，是重要的检测指标之一。
乙酸（Acetic acid）在乙酸激酶和磷酸转乙酰酶的相继作用下，使乙酸和 ATP 转变成乙酰辅酶 A 和 ADP ，继而在丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶依次催化 NADH 氧化生成 NAD+ ，通过检测 340nm 下 NADH 的下降量，进而计算得到乙酸含量的多少。
试剂盒的组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体 60mL×1 瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 粉剂 mg×1 瓶 | 4℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部，再加 3mL 的蒸馏水溶解备用。 |
试剂二 | 粉剂 mg×2 支 | -20℃保存 | 每支临用前甩几下使试剂落入底部 ，再加0.6mL 蒸馏水溶解备用。用不完的试剂分装后 -20℃保存，禁止反复冻融，三天内用完。 |
试剂三 | 粉剂 mg×1 支 | -20℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部，再加 0.6mL 的蒸馏水溶解备用，可分装冻存，禁止反复冻融。 |
试剂四 | 粉剂 mg×1 支 | -20℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部，再加 0.6mL 的蒸馏水溶解备用，可分装冻存，禁止反复冻融。 |
试剂五 | 液体μL×1 支 | -20℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部，再加 0.6mL 的蒸馏水溶解备用，可分装冻存，禁止反复冻融。 |
试剂六 | 粉剂 mg×1 支 | -20℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部，再加 0.6mL 的蒸馏水溶解备用。 |
试剂七 | 粉剂 mg×1 支 | -20℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部，再加 0.6mL 的蒸馏水溶解备用，可分装冻存，禁止反复冻融。 |
标准品 | 液体 mL×1 支 | 4℃保存 | 仅用来鉴定试剂盒中试剂是否正常（不参与结果计算）。 使用方法：该标准品（乙酸）浓度为24μmol/mL，用前再用蒸馏水稀释 24 倍成 1μmol/mL 备用；按照加样表中的测定管操作（样本更换成备用浓度的标准品）。 |
所需仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、低温台式离心机、恒温培养箱、可调式移液器、研钵、水浴锅、冰。
乙酸含量测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品和实验流程，避免样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 生物组织样本：称取约 0. 1g 组织(水分充足的果实样本取约 0.5g 组织或更多) ，加入1mL 提取液，进行冰浴匀浆。可于 80℃条件下孵育 20min(可使组织样本中干扰测定的酶蛋白变性失活) 。取出冷却至室温后，再于 12000rpm ，室温离心 10min ，取上清，置冰上待测。
【注】：若是非生物组织样本如食品等，可冰浴匀浆后，直接于 12000rpm，室温离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~ 10 的比例进行提取。
② 液体样品：
a. 近似中性的液体可直接取 1mL 至 EP 管中；12000rpm ，离心 10min ，上清液待测。
b. 酸性液体(PH<5)样本，则需先用 KOH（2M）调溶液的 PH 值至约 7.5 ，并在室温下孵育 30 分钟。取 1mL 转移到 EP 管中；12000rpm ，离心 10min ，上清液待测。
c. 若蛋白浓度比较高的样本如牛乳等，可直接取 1mL 牛乳液体样本至 EP 管中，于 80℃条件下孵育 20min（可使部分蛋白变形沉淀析出）。取出冷却至室温后，再于12000rpm ，室温离心 10min ，取上清，置冰上待测。
③ 细胞/细菌样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3S ，间隔 10S ，重复 30次）；12000rpm ，4℃离心 10min ，取上清液，置冰上待测。
【注】：也可按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~ 1000:1 的比例进行提取。
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