硫化氢(H2S)含量微量法/96样
测定意义:
H2S 是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的 H2S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用 ,并对自发性高血压、 出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。
测定原理:
硫化物(H2S、 HS-、S2-)与 N,N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵在酸性条件下反应生成亚甲基蓝 ,亚甲基蓝在 665nm 处有最大吸收峰 ,通过测定其吸光值可计算含量。
试剂盒组分与配制:
试剂名称 | 规格 | 数目 | 贮藏 |
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碱性保护剂 | 液体 100mL | x2 | 4°C |
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试剂一 | 液体 8mL | x1 | 4°C,避光 |
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试剂二 | 液体 4mL | x1 | 4°C,避光 |
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蛋白沉淀剂 | 液体 10mL | x1 | 4°C |
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标准品 | 粉剂 | x1 | 4°C | 3.9mg 硫化钠标准粉剂 |
所需仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、低温离心机、烘箱、震荡仪、冰、蒸馏水
样本处理(按照步骤依次操作):
组织样本
1、按照质量(g):碱性保护剂体积(mL)为 1 :5~10 的比例加入碱性保护剂 ,冰浴匀浆;
(样本取样量记为 W ,碱性保护剂用量记为 V 提)
(建议先尝试 0. 1g:1mL 的比例;样本含量较低的可增加样本量;样本量较少时可等比例减少操作用量)
1、然后 10,000g 离心力 4℃ 离心 10min ,取上清液 ,置冰上待测(记为样本待测液)。
细菌/细胞样本:
1、按照细胞数量(104 个):碱性保护剂体积( mL)为 500~1000 :1 的比例加入碱性保护
剂 ,冰浴超声波破碎细胞(功率 300w ,超声 3 秒 ,间隔 7 秒 ,总时间 3min);
(样本取样量记为 N (万个) ,碱性保护剂用量记为 V 提)(建议先尝试 50万:1mL 的比例;样本含量较低的可增加样本量;样本量较少时可等比例减少操作用量)
2、然后 10,000g 离心力 4℃ 离心 10min ,取上清液 ,置冰上待测(记为样本待测液)。
液体样本:
1、取 100μL 样本 ,加入 100μL碱性保护剂 ,混匀;(样本取样量记为 V ,碱性保护剂用量记为 V 提)(样本量较少时可等比例减少操作用量)
2、然后 10,000g 离心力 4℃ 离心 10min ,取上清液 ,置冰上待测(记为样本待测液)。
注 意:
样本提取后 ,应注意及时密封 ,并建议尽快完成检测;
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