C-a-spase-6活性测定试剂盒比色法/100T
中文名称 ：Caspase-6 活性检测试剂盒
英文名称 ：Caspase-6Activity Assay Kit
储存条件 ：6 个月
产品包装 ：盒装
检测方法 ：比色法
有 效 期 ： -20℃
产品规格 ：20T 、 50T 、 100T
试剂盒的组成和配制：
试剂名称/规格 | 20T | 50T | 100T | 保存条件 |
试剂一 | 液体 20mL×1 瓶 | 液体20 mL1瓶 | 液体 25 mL × 1瓶 | -20℃保存 |
试剂二 | 液体30mL×1 瓶 | 液体60 mL×1瓶 | 液体 120mL× 1瓶 | -20℃保存 |
试剂三 | 液体 0.25L × 1 支 | 液体0.55mLx支 | 液体 0.55mL ×2支 | -20℃保存 |
标准品 | 液体1mL × 1 支 | 液体1 mLx1支 | 液体1 mL× 1支 | -20℃保存 |
产品简介：
Caspase 是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含 10 多个成员。Caspase-6 也称 Mch-2，其前体蛋白被 granzyme B 剪切后形成活化的 caspase-6 二聚体 ， 可诱导细胞凋亡。 Caspase-6 可剪切凋亡的关键调节蛋白 PARP ， 剪切核膜 上关键蛋白 LaminA ，其对于LaminA 的识别位点是 VEID。
本试剂盒测定原理基于 Caspase-6 特异水解其多肽底物 Ac-VEID-pNA(N-acetyl-Val-Glu-Ile-Asp-p-nitroanilide) ， 释放出游离的硝基苯胺 pNA ，后者呈黄色在 405 nm 具有大吸收峰 ，采用可见光光度比色法测定。其吸光度值 对应于 Caspase-6的水解活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、 100μL 玻璃比色皿/96 孔板、 台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研 钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
样本处理（可适当调整待测样本量）：
1、培养细胞： 先收集细胞到离心管内 ，离心后弃上清；按照细胞数量（约 10⁶个）加 100 μL 试剂二（若裂 解不充分可提高至 150-200 μL），震荡重悬沉淀 ， 置冰上静置 15 min， 4℃ , 15000g 离心 10- 15min ，取上清置冰上 待测。
2、组织： 按照组织质量（g）：试剂二体积（ mL）为 1： 5~10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1 mL 试 剂二），冰浴研磨或充分剪碎，置冰上静置 15 min ，4℃ , 15000g离心 10- 15min ，取上清置冰上待测。
测定步骤：
1 可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上 ，调节波长至 405nm ，蒸馏水调零。
2 临用前用标准品稀释液将 5 mmol/L pNA 标准品稀释至 200 、 100 、 50 、 25 、 12.5 、0 μmol/L 的标准溶液待用。
注 意：
实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
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