C-a-spase-3活性测定试剂盒微板法/48样产品简介:Caspase-3 又称 CPP32、Yama 或 apopain,属于 CED-3 亚家族,是细胞凋亡过程中的一个关键酶。
利用 Caspase-3 分解底物 Ac-DEVD-pNA 产生黄色的对硝基苯胺(pNA) ,后者在405nm 有大吸收峰,通过测定吸光值升高速率即可得出 Caspase-3 酶活性大小。
试剂盒的组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 10mL×1 瓶
试剂二
液体 0.5mL×1瓶
-20℃保存
低温放置易冻住,放置室温使其解冻成液体再用,用不完的试剂分装后-20℃保存。
标准品
粉体 mg×1 支
若重新做标曲则用到该试剂。
所需仪器和用品:酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、天平、研钵、冰和蒸馏水。Caspase-3活性测定::建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品和实验流程,避免样本和试剂浪费!
样本制备::
① 组织样本:
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 4℃ × 12000rpm 离心 10min,取上清,置冰上待测。
[注]:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取。② 细菌或培养细胞:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s ,间隔 10s,重复 30 次);4℃×12000rpm 离心 10min,取上清,置冰上待测。
[注]:若增加样本量,可按照数量(104):提取液体积(mL)为 500-1000 :1 的比例进行提取。
上海酶联生物科技有限公司
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