延胡索酸酶(富马酸酶)活性测定试剂盒分光法/48样
产品简介：
延胡索酸酶又名延胡索酸水化酶 (EC 4.2.1.2),存在于线粒体中的富马酸酶是柠檬酸循环中的关键酶之一，存在于胞质中的富马酸酶与氨基酸和富马酸酯的代谢关系密切。
在人类中，该酶缺失会导致严重的健康问题，例如胎儿脑畸形，肌张力低下等。延胡索酸酶催化延胡索酸转化成 L-苹果酸，L-苹果酸在苹果酸脱氢酶的作用下，同时使 NAD+ 还原成 NADH, 通过检测 NADH 在340nm 的增加速率得出延胡索酸酶的活性大 小。
试剂盒的组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 液体60mL×1瓶 | -20℃保存 |
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试剂二 | 液体15mL×1瓶 | -20℃保存 |
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试剂三 | 液体0.5mL×1瓶 | -20℃保存 |
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试剂四 | 粉体mg×1支 | -20℃保存 | 临用前甩几下使粉剂落入底部，再加3.2mL蒸馏水溶解，可分装保存。 |
试剂五 | 粉体mg×1支 | -20℃保存 | 临用前甩几下使粉剂落入底部，再加1.7mL蒸馏水溶解，-20℃保存。 |
试剂六 | 液体μL×1支 | -20℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部，再加1.6mL蒸馏水溶解，-20℃保存。 |
试剂七 | 液体12mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂八 | 液体mL×1支 | 4℃保存 |
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所需仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径1cm)、 可调式移液器、低温离心机、研钵。
延胡索酸酶活性测定：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
线粒体制备：
(提示：整个线粒体的提取过程须保持4℃低温环境):
①称取约0 . 1g 组织或收集500万细胞，加入1mL 试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀浆，转移至离心管后于4℃×700g 离 心 1 0min。
②弃沉淀，上清液移至另一离心管中，4℃×12000g 离 心 1 0min。上清液即胞浆提取物，可用于测定胞浆中的延胡索酸酶(此步可选做),沉淀为线粒体。
③在沉淀(线粒体)中加入200 μL试剂二和2μL试剂三，超声波破碎(冰浴，功率20%或200W, 超声3s,间隔10秒，重复30次),液体置于冰上用于线粒体中延胡索酸酶活性测定。
[注]: 若增加样本量，可按照组织质量(g): 提取液体积(mL) 为1:5~10的比例进行提取，或按照细胞数量(104):提取液(mL) 为500~1000:1 的比例进行提取。
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