Mg2+-ATP 酶试剂盒分光法/24样
产品简介:
Mg²+-ATP 酶与细胞维持胞内 Mg²+ 浓度有关,可在运输 Mg²+ 的同时催化 ATP 水解生成 ADP 和无机磷。通过测定无机磷的量可确定该酶活性高低。
试剂盒的组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 提取液60mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 粉体mg×1瓶 | 4℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部,再加18mL蒸馏水,混匀溶解备用。 |
试剂二 | 粉剂mg×1瓶 | -20℃保存 | 用前甩几下蒸馏使试剂落入底部,再加9mL蒸馏水。混匀溶解备用。 |
试剂三 | 液体9ml×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂四 | A:粉体mg×1瓶 | 4℃保存 | 临用前向A试剂中加1.35mL的B液,再加17.4mL的蒸馏水,混匀溶解备用。 |
B:液体1mL×1瓶 |
标准品 | 粉 体 m g × 1 支 | 4℃保存 | 若重新做标曲,则用到该试剂。 |
[注]: 全程操作需无磷环境;试剂配置好用新的枪头和玻璃移液器等,也可以用一次性塑料 器皿,避免磷污染。
所需仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径1cm)、 水浴锅、台式离心机、可调式移液 器、研钵、冰和蒸馏水。
Mg²+-ATP酶活性检测:
建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
①组织样本:
称取约0 . 1g 组织,加入1mL 提取液,进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离 心 1 0min,取上清,置冰上待测。
[注]: 若增加样本量,可按照组织质量(g): 提取液体积(mL) 为1:5~10的比例进行提取。
②细菌/真菌样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约500万细菌或细胞加入1mL 提取液,
超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率200W, 超 声 3s, 间 隔 1 0s, 重复30次);12000rpm 4℃离心10min, 取上清,置冰上待测。
[注]: 若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL) 为500~1000:1 的比例进行提取。
③液体样本:
直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
上机检测:
①可见分光光度计预热30min 以上,调节波长至700nm, 蒸馏水调零。
②所有试剂解冻至室温(25℃)。
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