荧光素酶染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 荧光素酶染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Luciferase Dye-based Quantitative Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR2661 |
产品概述
本试剂盒基于SYBR Green I染料法或荧光素酶检测原理，专用于一步法实时荧光定量PCR（qPCR）或定性PCR分析，适用于RNA/DNA模板的高灵敏度检测。试剂盒整合反转录与扩增步骤，优化反应体系以提升检测效率和稳定性。
产品组分
核心反应预混液：含热启动Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（如SYBR Green I或荧光素酶底物）。
酶混合物：包括耐热反转录酶（适用于RNA模板）。
阴性/阳性对照：提供标准品用于校准（部分产品含梯度稀释阳性对照）。
无核酸酶水：用于体系配制。
保存条件与保质期
储存温度：-20℃避光保存，避免反复冻融（4℃可稳定存放3个月）。
有效期：24个月（生产日期见包装标签）。
技术参数
灵敏度：
RNA模板：最低检测限0.1 pg（高表达靶标）至1 pg（中等表达靶标）。
DNA模板：可检测单拷贝基因。
特异性：熔解曲线分析确保扩增产物单一性。
兼容性：适配主流荧光定量PCR仪（支持No Rox/Low Rox/High Rox平台）。
操作流程
1. 样本准备：
RNA/DNA提取：按标准方法纯化样本，避免降解。
阳性对照稀释：按10倍梯度稀释至10E2–10E7拷贝/μL（需独立操作防止污染）。
2. 反应体系配制（以20 μL为例）：
| 组分 | 体积 |
| 2×预混缓冲液 | 10 μL |
| 酶混合物 | 1 μL |
| 模板RNA/DNA | 2 μL |
| 引物（10 μM） | 各0.4 μL |
| 无核酸酶水 | 至20 μL |
3. 程序设置：
反转录（RNA模板）：50℃ 15分钟。
预变性：95℃ 5分钟。
扩增：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（40循环），采集荧光信号。
熔解曲线分析（染料法）：60–95℃逐步升温。
注意事项
应用限制：仅限科研使用，不适用于临床诊断或治疗。
污染控制：分区操作（样本处理、扩增、检测），使用带滤芯枪头。
数据解读：定性检测需结合电泳验证；定量分析需标准曲线。
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