真菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 真菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Fungi Universal Dye-based Quantitative Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR2677 |
产品概述
本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术开发，适用于真菌DNA的定性与定量检测。采用优化预混液（含荧光染料），无需额外调节ROX，兼容主流qPCR仪，具有高灵敏度、高特异性和宽线性范围（≥5个数量级）的特点。
产品组分
预混液：2× Universal qPCR Fluore Green Master Mix（含染料，无需ROX校正）
阳性对照：无传染性真菌DNA片段（1×10^8拷贝/μL）
模板稀释液：荧光PCR专用
RNase-free水：用于体系配制
说明书
规格与储存
规格：50T/盒（20 μL反应体系）
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（解冻后需冰上操作）。
有效期：12个月。
实验步骤
试剂准备
预混液从-20℃取出后置于冰上缓慢解冻（5-10分钟），轻弹混匀，短暂离心（1000 rpm，5秒）去除管壁液体。
注意：避免涡旋震荡或室温长时间放置。
标准曲线制备（定量检测需选做）
标记6管，依次加入45 μL稀释液，梯度稀释阳性对照（10^7–10^2拷贝/μL），每步换枪头并震荡混匀。
反应体系配制（20 μL/反应）
| 组分 | 体积（μL） |
| 2×预混液 | 10 |
| 引物（10 μM） | 0.8（各） |
| 模板DNA | 2 |
| RNase-free水 | 补至20 |
PCR程序设置
预变性：95℃, 3分钟
循环阶段（40–45次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）
溶解曲线分析（可选）：60–95℃, 每0.5℃ 5秒
注意事项
污染控制：标准品稀释与样品处理需分区域操作，使用带滤芯枪头。
数据判读：Ct值偏差≤0.2表明重复性良好；非特异性扩增需优化引物或模板浓度。
应用限制：仅限科研使用，不可用于临床诊断。
性能参数
灵敏度：检测下限≤10拷贝/μL
特异性：针对真菌保守序列设计，无交叉反应
耗时：约46分钟完成扩增
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