预期用途

本试剂盒用于体外定性检测咽拭子、肛拭子、粪便或呕吐物等样本中的诺沃克病毒(Norwalk Virus)RNA,适用于临床辅助诊断或流行病学监测。检测结果需结合临床表现及其他实验室指标综合判断。
产品名称 | 诺沃克病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Norwalk Virus (NV) Real-Time RT-PCR Kit (Dye-Based) |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR2738 |

检测原理

基于荧光定量RT-PCR技术,通过特异性引物与染料(如SYBR Green)结合,靶向扩增诺沃克病毒保守序列。荧光信号随扩增产物积累实时增强,通过循环阈值(Ct值)定量分析病毒RNA拷贝数。
试剂盒特点

高特异性:针对诺沃克病毒保守序列设计引物,无交叉反应。
高灵敏度:检测限低至几百拷贝/反应。
便捷性:即开即用,用户仅需提供纯化后的RNA样本。
防污染设计:一管式闭管检测,避免扩增产物污染。
操作步骤

1. 样本处理
提取样本总RNA(建议使用2μg),置于无RNase离心管中。
2. 逆转录反应
加入0.5μg引物至RNA样本(总体积≤15μL),70℃孵育5分钟以消除二级结构,立即冰浴冷却。
配制逆转录反应体系(终体积25μL):
5× M-MLV Buffer
dNTPs(各10mM)
Recombinant RNasin抑制剂
M-MLV逆转录酶
37℃(随机引物)或42℃(特异性引物)孵育60分钟。
3. 荧光定量PCR
将逆转录产物加入预混PCR反应液(含荧光染料),按以下程序运行:
预变性:95℃ 5分钟
扩增:95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(40循环)
荧光信号采集(60℃延伸阶段)。
结果判读
阳性:Ct值≤35且扩增曲线呈典型S型。
阴性:无Ct值或Ct值>38。
灰区:35<Ct值≤38,建议复测。
注意事项

实验全程需在无RNase环境下操作,避免RNA降解。
试剂解冻后需充分混匀并短暂离心。
不同批次试剂组分不得混用。
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