松材线虫染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 松材线虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Bursaphelenchus xylophilus Dye-based Quantitative Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR2696 |
产品用途
本产品适用于科研领域对松材线虫的DNA进行高灵敏度、特异性荧光定量PCR检测，不可用于临床诊断。
试剂盒组成
阳性对照（1×10⁸ 拷贝/µL）
DEPC-H₂O（无核酸酶水）
荧光定量PCR预混液（含染料、dNTPs、Taq酶等）
实验前准备
自备材料：核酸提取试剂盒、无水乙醇、离心管（1.5/2 mL）、带滤芯枪头（10/200/1000 µL）、冰盒、涡旋混匀仪、高速离心机（12000 rpm）、移液器（0.5-1000 µL）。
分区操作：建议在独立样本制备区、试剂配置区及扩增区进行，避免交叉污染。
操作步骤
DNA提取（样本制备区）
使用兼容的核酸提取试剂盒提取样本DNA，确保纯度（A260/A280比值1.8-2.0）及浓度≥10 ng/µL。
标准曲线制备（样本制备区）
标记6支离心管为7至2号，每管预先加入45 µL DEPC-H₂O。
7号管：加入5 µL阳性对照（1×10⁸ 拷贝/µL），涡旋混匀1分钟，得到1×10⁷ 拷贝/µL标准品。
梯度稀释：依次换枪头，取5 µL上一步稀释液加入下一管，依次获得1×10⁶至1×10² 拷贝/µL的标准曲线样品。所有稀释品需置于冰上暂存。
PCR反应体系配置（试剂配置区）
按以下比例配制反应混合液（以20 µL体系为例）：
预混液：10 µL
引物探针混合液：2 µL
模板DNA/标准品：2 µL
DEPC-H₂O：6 µL
荧光定量PCR扩增（扩增区）
将反应管置于荧光定量PCR仪中，设置程序：
预变性：95℃ 5分钟
循环阶段（40个循环）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）
分析结果：通过软件生成标准曲线，计算样本中松材线虫DNA拷贝数。
注意事项
阳性对照需单独操作，避免污染。
使用带滤芯枪头，减少气溶胶污染风险。
试剂开封后需分装保存，避免反复冻融。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪（如TH-P480XC系统），支持4通道48孔检测，需配合高速离心机（≥12000 rpm）及恒温金属浴使用。
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