甲型流感（禽流感）病毒N6亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

检验原理

基于实时荧光定量PCR技术，针对甲型流感病毒N6亚型保守基因区域（如血凝素或神经氨酸酶基因）设计特异性引物及TaqMan探针。通过逆转录（RT）将病毒RNA转化为cDNA，随后进行PCR扩增，实时监测荧光信号变化，实现病原体核酸的定性或定量检测。

试剂组成

逆转录/PCR反应液：含缓冲液、dNTPs、逆转录酶等，支持RNA逆转录及扩增。

酶液：高保真DNA聚合酶及荧光标记探针。

引物与探针：针对IAV-N6特异性设计，探针携带荧光基团与淬灭基团。

质控品：

阳性质控品：验证试剂盒灵敏度及扩增效率。

阴性质控品：排除污染及非特异性反应。

储存条件与有效期

储存：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤5次）。

有效期：12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500

安捷伦 MX3000P/3005P

LightCycler

Bio-Rad、Eppendorf系列

检测流程

样本采集：鼻咽拭子、呼吸道分泌物等，需低温保存。

核酸提取：推荐磁珠法或离心柱法提取病毒RNA。

RT-PCR反应：

将RNA模板、引物、探针及酶混合。

程序设置：逆转录（50℃ 15-30分钟）→预变性（95℃ 2-5分钟）→扩增循环（95℃ 10-15秒，60℃ 30-60秒，40-45循环）。

结果分析：根据荧光阈值（Ct值）判定样本阳性/阴性，定量需标准曲线。

性能特点

高灵敏度：可检测低至10^2拷贝数的病毒RNA。

高特异性：不与其它呼吸道病原体交叉反应。

双重质控：内置阴阳性对照，确保结果可靠性。

应用范围：适用于科研及临床病原学诊断（注：部分产品明确标注“仅供科研”）。

注意事项

不同批号组分不可混用。

操作需在无菌环境下进行，避免RNA降解。

定量检测时需建立标准曲线，线性范围≥5个数量级。

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