检验原理
本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，针对甲型流感病毒N3亚型的基因保守区域设计特异性引物及探针。通过荧光信号实时监测扩增过程，实现对病毒核酸的定性及定量分析。反应体系中若存在目标核酸模板，PCR扩增将释放荧光信号，仪器通过检测信号强度输出结果。
产品名称 | 甲型流感（禽流感）病毒N3亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Avian Influenza A Virus N3 Subtype Dye-based Quantitative Real-time RT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3065 |
样本要求
样本类型：鼻咽拭子、喉拭子或呼吸道分泌物。
采集与保存：
使用无菌拭子采集样本后，立即置于病毒运输培养基（含抗生素和稳定剂）。
短期保存需2-8℃冷藏（72小时内检测），长期保存应置于-70℃以下。
灭活处理：建议56℃孵育30分钟以降低生物安全风险。
操作流程
核酸提取：
采用磁珠法或柱提法提取RNA，需严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区）。
推荐加入外源性内标（如MS2噬菌体）监控提取效率。
PCR扩增：
反应体系：包含引物、探针、逆转录酶、Taq DNA聚合酶及dNTPs。
扩增程序：逆转录（50℃ 15分钟）→预变性（95℃ 3分钟）→循环扩增（95℃ 15秒，60℃ 1分钟，共40个循环）。
结果判读：
阳性：Ct值<40且扩增曲线呈典型S型。
阴性：无扩增信号或Ct值≥40。
灰区结果（Ct 35-40）：建议复测或通过测序确认。
质量控制
每批次需包含弱阳性对照（Ct 32±2）、阴性对照及空白对照。
批内变异系数（CV）应<5%，室间质评符合率≥95%。
内标Ct值>32提示样本采集或提取不合格，需重新检测。
注意事项
操作需在BSL-2级实验室进行，废弃物需121℃高压灭菌处理。
避免交叉污染，推荐使用带滤芯吸头及分区操作。
试剂保存于-20℃，避免反复冻融。
局限性
检测结果需结合临床表现及流行病学资料综合判断。
极低病毒载量样本可能产生假阴性，建议对高怀疑样本进行复核或病毒分离。
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关键字： 甲型流感（禽流感）病毒N3亚型;染料法;PCR试剂盒;