实验原理:
本试剂盒采用双抗体夹心法定量检测人组织因子(TF)含量。
捕获抗体预包被在微孔板中,与样本中的TF结合。
酶标二抗(HRP标记)与TF结合,形成“抗体-抗原-二抗”复合物。
加入底物(TMB)后,HRP催化显色反应,颜色深浅与TF浓度成正比,通过酶标仪(450nm)测定OD值计算浓度。
样本处理:
1、血清/血浆
采集后立即离心(1000×g,10-30分钟),取上清。
避免溶血,否则可能导致假阳性。
2、细胞上清
1000×g离心20分钟,取上清检测。
可短期(1-2周)保存于-20℃,长期需-80℃,避免反复冻融。
3、组织匀浆
用生理盐水或PBS匀浆,离心取上清。
避免使用化学裂解液,可能干扰检测。
操作步骤:
1、平衡与准备
将微孔板从铝箔袋中取出,室温平衡60分钟。
浓缩洗涤液用双蒸水稀释至1×工作液。
2、加样与孵育
标准品孔:依次加入50μL不同浓度标准品。
样本孔:加入50μL待测样本(浓度过高时用稀释液稀释)。
空白孔:不加样本。
每孔加入100μL酶标二抗,封板膜密封,37℃孵育60分钟。
3、洗涤
弃去液体,每孔加350μL洗涤液,静置1分钟后甩干,重复5次。
洗板机操作时确保吸液孔通畅。
4、显色与终止
每孔加入50μL底物A/B,37℃避光孵育15分钟。
加入50μL终止液,15分钟内用酶标仪测450nm OD值。
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上海抚生实业有限公司
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