脑膜炎奈瑟菌W群染料法荧光定量PCR试剂盒

脑膜炎奈瑟菌W群染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术，专用于检测脑膜炎奈瑟菌W群（Neisseria meningitidis Group W）的核酸。通过特异性引物和荧光染料（如SYBR Green）对目标基因进行扩增与实时检测，适用于科研实验中的定性分析。

检测原理

基于荧光定量PCR技术，通过特异性引物扩增脑膜炎奈瑟菌W群的保守基因（如ctrA或sodC）。染料与双链DNA结合后释放荧光信号，通过监测扩增曲线和Ct值（循环阈值）判定样本中目标DNA的存在及相对含量。

试剂盒组成

PCR反应液：含缓冲液、dNTPs、Mg²⁺等反应成分。

特异性引物：针对脑膜炎奈瑟菌W群基因组设计。

荧光染料：SYBR Green或其他兼容染料。

酶混合物：含热启动Taq DNA聚合酶。

阳性对照：含脑膜炎奈瑟菌W群DNA（已知浓度），用于验证试剂盒性能。

阴性对照：无菌水或无模板对照（NTC），用于排除污染。

核酸提取试剂（可选）：用于临床样本（如脑脊液、血液）的DNA提取。

操作步骤

样本制备

采集临床样本（脑脊液、咽拭子等），按规范提取DNA。

若使用试剂盒提供的阳性对照，需按梯度稀释（如10⁷~10¹拷贝/μL）制备标准曲线。

PCR反应体系配制

按说明书比例混合PCR反应液、引物、酶及模板DNA。

每反应建议终体积20~50 μL，具体参数参考仪器要求。

扩增程序设置

预变性：95℃ 2~5分钟。

循环阶段（40~45轮）：95℃ 15秒（变性）→ 60℃ 30~60秒（退火/延伸，采集荧光信号）。

结果分析

通过扩增曲线和Ct值判定阳性/阴性结果。

标准曲线用于定量分析（需满足R²≥0.99）。

注意事项

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

污染控制：分区操作（样本处理、PCR配制、扩增区），使用无核酸酶耗材。

适用性：仅限科研用途，临床诊断需进一步验证。

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