猪霍乱病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 猪霍乱病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Classical Swine Fever Virus (CSFV) Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3229 |
预期用途
本试剂盒基于实时荧光RT-PCR技术，定性检测猪霍乱病毒（CSFV）核酸，适用于临床样本（如血液、组织脏器、肠内容物）的病原学诊断及流行病学监测。
检测原理
针对CSFV基因组保守区域设计特异性引物和探针，通过逆转录（RT）将病毒RNA转化为cDNA，随后进行荧光定量PCR扩增。反应过程中探针与靶序列结合释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现定性分析。
试剂盒组成
RT-PCR反应液（冻干粉或预混液，复溶后反应体系≥25μL/反应）
逆转录酶混合液
阳性对照（含CSFV靶基因的质粒或灭活病毒）
阴性对照（灭菌纯水）
复溶剂（如适用）
储存条件及有效期
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI 7500/QuantStudio系列
Bio-Rad CFX系列
Roche LightCycler 480
杭州博日、安捷伦MX系列等
样本要求
样本类型：血清、空肠内容物、淋巴结、脾脏等组织。
采集与处理：
血清：无菌采集静脉血2-3 mL，分离血清后密闭送检。
组织：取1 g组织匀浆后置于PBS中，离心取上清。
肠内容物：1 g样本与1 mL PBS混合，离心后取上清。
运输与保存：2-8℃短期保存（≤24小时），-70℃长期保存，避免反复冻融。
检测流程
核酸提取：使用配套或通用RNA提取试剂盒。
反应体系配制：按说明书比例混合反应液、酶及模板RNA。
PCR程序：
50℃逆转录10分钟（如未预混逆转录酶）；
95℃预变性2分钟；
95℃ 10秒→60℃ 35秒，共40个循环（60℃采集荧光信号）。
性能参数
灵敏度：≤1000 copies/mL。
特异性：与猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪瘟相关病毒无交叉反应。
重复性：批内/批间CT值变异系数（CV）<3%。
结果判读
阳性：Ct值≤35且扩增曲线呈S型；
阴性：无Ct值或Ct值>40。
注意事项
实验分区操作，避免气溶胶污染。
试剂解冻后需充分混匀，短暂离心后使用。
废弃物质按生物危害品处理。
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