海藻巴斯德菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 海藻巴斯德菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Pasteurella algae Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3231 |
产品概述
本试剂盒专为海藻巴斯德菌（Pasteurella trehalosi）的快速、高灵敏度检测设计，采用染料法荧光定量PCR技术，适用于科研领域的定性及定量分析。定量检测线性范围覆盖5个数量级，灵敏度可达几百拷贝/反应。
产品特点
即开即用：用户仅需提供待测DNA模板。
高特异性：引物基于海藻巴斯德菌保守序列设计，无交叉反应。
一管式检测：减少操作步骤，避免后续污染。
配套阳性对照：提供1×10^8拷贝/μL的DNA片段作为阳性对照（非活体样本）。
兼容性：可与多数细菌DNA提取试剂盒配合使用。
规格及成分
| 成分 | 包装规格 | 保存条件 |
| 2×qPCR MagicMix | 500 μL（棕色管） | -20℃避光 |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） | -20℃ |
| 海藻巴斯德菌引物混合物 | 100 μL（白盖） | -20℃ |
| PCR阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL（红盖） | -20℃ |
| 使用手册 | 1份 | — |
注：试剂盒可完成50次20μL体系的荧光定量PCR反应。
运输与保存
运输条件：低温运输（冰袋或干冰）。
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
自备试剂
DNA模板（需用户自行提取）。
10×ROX荧光校正染料（根据PCR仪器型号选择添加）。
实验流程
1. 样本制备
样本数量：若检测N个样品，需额外设置2个对照（N+2）：
阳性对照（PC）：使用试剂盒提供的阳性对照DNA稀释至与样品体积一致。
阴性对照（NC）：以无菌水替代模板。
DNA提取：推荐使用兼容的商用DNA提取试剂盒。
2. 阳性对照稀释（独立操作区）
标记6管，编号7至2，每管加45 μL模板稀释液。
从7号管（初始浓度1×10^8拷贝/μL）开始，依次10倍稀释至2号管（1×10^3拷贝/μL），每次换枪头并充分震荡。
3. PCR反应体系
按20μL体系配制：
2×qPCR MagicMix：10 μL
引物混合物：1 μL
DNA模板：2 μL
ROX（可选）：根据仪器要求添加。
补水至20 μL。
4. 扩增程序
预变性：95℃ 3分钟。
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。
5. 结果分析
定量检测：根据标准曲线计算拷贝数。
电泳验证（可选）：取5-10 μL产物进行1.5%-2%琼脂糖凝胶电泳，预期条带约200 bp。
质控要求：阴性对照无扩增，阳性对照Ct值≤35，否则实验无效。
注意事项
操作分区进行（样本制备区、扩增区），避免污染。
阳性对照稀释需在独立区域完成。
本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。
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