皮里陶病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品用途

本试剂盒专为科研用途设计，用于皮里陶病毒（PIRV）核酸的荧光定量检测，不适用于临床诊断。

产品特点

即开即用：用户仅需提供病毒样本即可进行检测。

高特异性：基于皮里陶病毒保守序列设计的引物，无交叉反应。

高灵敏度：检测下限可达几百拷贝/反应。

闭管检测：一管式荧光定量PCR，避免扩增产物污染。

稳定可靠：50次反应体系（20μL/次），批内重复性优异。

规格与成分

| 成分 | 规格/包装 | 保存条件 |

| 2×qPCR MagicMix | 500μL（棕色管） | -20℃避光 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） | -20℃避光 |

| PIRV引物混合物 | 100μL（白盖） | -20℃避光 |

| PIRV阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL（红盖） | -20℃避光 |

| 使用手册 | 1份 | 常温保存 |

运输与保存

运输条件：低温运输（-20℃冰袋或干冰）。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。避免反复冻融（建议分装使用）。

自备试剂

DNA/RNA模板（需无核酸酶污染）。

10×ROX校正染料（根据机型需求，参见仪器手册）。

使用方法

1. 阳性对照稀释（以10²~10⁷拷贝/μL梯度为例）

在独立洁净区操作，避免污染。

取6支离心管，编号7~2，每管预加45μL模板稀释液。

依次梯度稀释：从7号管（10⁷拷贝/μL）开始，每次取5μL至下一管，涡旋混匀，冰上保存。

2. 样本处理

病毒样本需经核酸提取（推荐使用柱式法或磁珠法试剂盒）。

阴性对照建议使用无核酸酶水。

3. PCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积 |

| 2×qPCR MagicMix | 10μL |

| PIRV引物混合物 | 2μL |

| 模板DNA/RNA | 2μL |

| 无核酸酶水 | 补至20μL |

4. 扩增程序（以ABI 7500为例）

逆转录：50℃ 15分钟（仅RT-PCR需此步骤）。

预变性：95℃ 3分钟。

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）。

注意事项

操作需在PCR洁净台中进行，穿戴防护装备。

阳性对照与样本需分区域处理，避免气溶胶污染。

不同批次试剂不可混用，开封后建议3个月内使用完毕。

若Ct值＞35，建议重复检测或重新采样。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche LightCycler等）。

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