卡萨诺尔森林病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 卡萨诺尔森林病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Kyasanur Forest Disease Virus (KFDV) Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3444 |
技术原理与特点
染料法荧光定量PCR：基于SYBR Green I染料与双链DNA结合发光的原理，实时监测扩增曲线。
高灵敏度与特异性：引物针对KFDV高度保守区设计，检测限≤50 copies/反应，线性范围达5个数量级。
内控优化：含阳性对照（无传染性DNA片段），避免假阴性；阴性对照确保无污染。
即开即用：预混反应体系，仅需提供RNA模板。
操作流程
标准曲线制备（10^2–10^7 copies/μL）
稀释阳性对照：
使用专用稀释液进行6个10倍梯度稀释（标记为2–7号管）。
7号管加入5μL阳性对照（1×10^8 copies/μL），震荡混匀，得10^7 copies/μL标准品，依次稀释至10^2 copies/μL。
注意：操作需在独立区域，避免交叉污染。
加样：
每反应管加入：10μL预混液、2μL引物探针混合液、5μL模板（标准品/待测样本）。
PCR扩增程序
逆转录：45℃ 25分钟
预变性：95℃ 2分钟
扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 45秒（荧光采集）
结果判读
阳性：Ct值≤36，且扩增曲线呈指数增长。
临界值：36<Ct<40需重复检测，二次结果需指数增长。
阴性：无扩增曲线或Ct值≥40。
注意事项
生物安全：
疑似样本需在BSL-3级实验室处理，废弃物121℃高压灭菌30分钟。
运输包装符合UN2814标准。
样本要求：
发病5天内静脉血3–5mL，避免溶血。
推荐使用QIAGEN Viral RNA Kit提取RNA，Carrier RNA添加量1μg/μL。
质控：
阳性对照Ct值应<35，阴性对照无扩增。
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