差异支原体染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 差异支原体染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Mycoplasma dispar Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3463 |
产品用途
本试剂盒适用于临床或科研中差异支原体（如解脲支原体等）核酸的定性及定量检测，通过染料法荧光定量PCR技术，实现对样本中靶基因的高灵敏度、高特异性分析。
检测原理
采用特异性引物和荧光染料（如SYBR Green I）与PCR扩增产物结合，通过实时监测荧光信号强度，定量分析目标DNA的拷贝数。
性能参数
检测范围：线性定量范围覆盖10²~10⁷拷贝/μL（以标准曲线为例）。
灵敏度：最低检出限为1×10³基因拷贝/mL。
特异性：针对差异支原体靶基因设计引物，避免交叉反应。
试剂盒组成
PCR反应液：含dNTPs、缓冲液等。
DNA聚合酶：耐热Taq酶。
阳性对照：无传染性DNA片段（1×10⁸拷贝/μL）。
阴性质控品：无靶标DNA的缓冲液。
荧光染料：SYBR Green I或其他兼容染料。
DNA提取液（可选）：用于样本预处理。
操作步骤
样本制备
采集分泌物（如尿道或宫颈拭子），避免细菌污染。
样本保存：室温≤8小时，4~8℃≤72小时，-20℃可保存6个月（避免反复冻融）。
标准曲线制备（以6个稀释度为例）
标记离心管（7~2号），依次加入45 μL稀释液。
7号管加入5 μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），震荡混匀，得10⁷拷贝/μL标准品。
逐级稀释至10²拷贝/μL（每次更换枪头）。
PCR反应体系
20 μL体系：含2 μL模板DNA、10 μL PCR反应液、0.5 μL酶、7.5 μL无核酸酶水。
扩增程序
预变性：95℃ 5分钟。
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。
质量控制
内标监控：全程质控减少假阴性。
阴阳性对照：每批次检测需包含，确保试剂有效性。
注意事项
标准品稀释需在独立区域操作，避免污染。
使用带滤芯枪头，防止气溶胶污染。
自动化提取系统（如天隆系统）可提高重复性，减少人工误差。
储存与运输
试剂盒保存于-20℃，避免反复冻融。
运输需符合生物安全要求，室温或冰袋运输。
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